人百日咳毒素抗体PTAb酶联免疫分析试剂盒使用说明书.docxVIP

人百日咳毒素抗体(PTAb)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

96T使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中百日咳毒素抗体(PTAb)表达。

实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人百日咳毒素抗原抗体(PTAb)表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中百日咳毒素抗体(PTAb)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比拟，从而判定标本中人百日咳毒素抗体(PTAb)的存在与否。

试剂盒组成标本要求

1

30倍浓缩洗涤液

20mlX1瓶

7

终止液

6mlXI瓶

2

酶标试剂

6mlX1瓶

8

阳性对照

0.5mlX1瓶

3

酶标包被板

12孔义8条

9

阴性对照

0.5mlX1瓶

4

样品稀释液

6mlX1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂A液

6mlX1瓶

11

封板膜

2张

6

显色剂B液

6mlXl/瓶

12

密封袋

1个

.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应防止反复冻融

.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)

.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50)11。然后在待测样品孔先加样品稀释液40|J,然后再加待测样品10|ilo加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸偏水30倍稀释后备用.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

.加酶：每孔加入酶标试剂50川，空白孔除外。

.温育：操作同3。

.洗涤：操作同5。

.显色：每孔先加入显色剂A50W，再加入显色剂B50|iL轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

.终止：每孔加终止液50|J,终止反响（此时蓝色立转黄色）。

.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结:

准备试剂，样品和标准品

计算和结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值NL00；阴性对照平均值W0.10

临界值（CUTOFF）计算：临界值二阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定：样品0口值＜临界值（CUTOFF）者为百日咳毒素抗体（PTAb）阴性

阳性判定：样品OD值N临界值（CUTOFF）者为百日咳毒素抗体（PTAb）阳性

O考前须知

.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

.封板膜只限一次性使用，以防止交叉污染。

.底物请避光保存。

.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意平安。

保存条件及有效期.试剂盒保存：；2-8℃o

.有效期：6个月