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荧光原位杂交课件

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目录

荧光原位杂交概述

01

荧光原位杂交技术

03

荧光原位杂交实验操作

05

荧光原位杂交原理

02

荧光原位杂交应用实例

04

荧光原位杂交注意事项

06

荧光原位杂交概述

01

技术定义

检测特定DNA序列

用荧光标记探针检测细胞、组织中的DNA序列

荧光原位杂交

非放射性分子技术

01

02

发展历程

多彩FISH与DNA纤维FISH提升应用

技术革新

1980年代首报道，后逐渐发展成熟

关键进展

起源于20世纪70年代后期

技术起源

应用领域

FISH用于检测染色体异常，如唐氏综合症等遗传病。

遗传病诊断

广泛应用于肿瘤细胞染色体异常检测，助力癌症研究与治疗。

肿瘤研究

荧光原位杂交原理

02

基本原理

用荧光素标记探针，与样本DNA杂交后镜下观察。

荧光标记杂交

依据碱基互补原则，探针与靶DNA结合实现定位分析。

碱基互补配对

杂交过程

探针制备标记

荧光素标记探针，分直接间接法。

样本杂交变性

探针样本变性后，按碱基配对杂交。

信号检测

01

荧光标记杂交

荧光探针与DNA杂交，检测特定序列。

02

显微镜观察

杂交信号在显微镜下观察，实现定性定量。

荧光原位杂交技术

03

技术流程

探针设计并标记荧光

探针制备标记

样本与探针变性处理

样本探针变性

杂交洗脱封片

杂交后洗涤并封片

关键步骤

细胞组织制片，DNA变性处理。

样品制备变性

探针杂交，洗涤去除未结合探针。

探针杂交洗涤

荧光镜下观察，分析信号定位。

荧光观察分析

技术要点

采用荧光素标记，安全经济。

非放射性标记

遗传病诊断、肿瘤研究等多领域应用。

广泛应用

多色FISH，同时检测多种序列，分辨率高。

高分辨率检测

01

02

03

荧光原位杂交应用实例

04

基因定位

01

遗传病诊断

FISH技术用于定位遗传病相关基因，辅助精准诊断。

02

肿瘤研究

在肿瘤遗传学研究中，FISH技术可明确检测染色体重排情况。

病理诊断

FISH技术用于乳腺癌、肺癌等肿瘤辅助诊断，精准指导靶向药物使用。

肿瘤辅助诊断

FISH技术可检测染色体异常，如唐氏综合征，助力遗传病诊断。

遗传病检测

细胞学研究

FISH定位可视化特定基因表达，助力基因功能解析。

基因表达研究

01

检测非整倍体、重组，为遗传病、肿瘤研究提供依据。

染色体畸变检测

02

荧光原位杂交实验操作

05

实验准备

准备荧光标记探针、显微镜等必要器材及试剂。

器材与试剂

对样本进行固定、变性等预处理，确保杂交效果。

样本处理

实验步骤

二甲苯酒精脱蜡干燥

切片脱蜡处理

变性杂交洗涤观察

探针杂交过程

结果分析

信号强度评估

分析荧光信号强度，评估杂交效率及目标序列丰度。

图像解读

观察荧光信号位置，判断目标序列是否存在及位置。

01

02

荧光原位杂交注意事项

06

实验条件控制

样本及时固定，切片厚度适中。

固定与切片

严格控制变性与杂交的温度、时间。

温度与时间

常见问题解决

选10%中性缓冲福尔马林，固定6～48h。

固定液选择

煮沸和酶消化要规范，避免掉片和信号弱。

切片预处理

实验结果评估

01

图像清晰度

评估荧光信号的清晰度和背景噪音，确保图像质量高，便于准确解读。

02

杂交效率

检查杂交效率，确保目标序列与探针充分结合，避免假阴性或假阳性结果。

谢谢

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