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2022子宫内膜异位症对卵泡颗粒细胞的影响(全文)摘要

子宫内膜异位症患者常伴有卵泡发育缓慢、卵母细胞成熟障碍等问题，严重影响患者生育能力。子宫内膜异位症患者颗粒细胞凋亡及氧化应激事件的发生、细胞能量代谢及类固醇合成能力受损可能是其卵泡发育异常、卵母细胞质量下降的原因。而卵巢内膜异位囊肿引起炎症反响发生，使卵泡过度激活、卵巢皮质纤维化，直接影响卵巢储藏。本文对子宫内膜异位症患者卵泡颗粒细胞凋亡及氧化应激事件、类固醇激素合成及能量代谢功能异常进行讨论，并从炎症反响的角度解释内膜异位囊肿对卵巢储藏的不利影响。

子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是育龄期妇女常见的雌激素依赖性慢性炎症性疾病，与盆腔疼痛和不孕症密切相关。在育龄期女性中,EMS发病率为2%~10%,在不孕症女性中发病率升高到50%囚。即使是轻度EMS也严重降低患者的自然妊娠率，最终有10%~25%EMS患者要借助辅助生育技术来获得妊娠［2］。EMS从卵泡发育、精卵结合、胚胎形成、子宫内膜容受性等方面影响女性生育能力。在卵泡发育过程中颗粒细胞逐渐分化成熟，合成分泌类固醇激素及卵泡液，其与卵母细胞之间良好的双向沟通是卵母细胞减数分裂恢复、胞质成熟的基础。因此，颗粒细胞功能状态在卵母细胞成熟和卵泡发育过程中发挥重要作用。本文旨在阐述EMS患者颗粒细胞凋亡和氧化应激事件的发生，EMS对颗粒细胞类固醇激素合成、线粒体能量代谢功能及卵巢储藏的影响。

-EMS患者颗粒细胞凋亡增加卵泡颗粒细胞及膜细胞的凋亡发生介导了卵泡闭锁。当颗粒细胞内生存促进因子消耗，叉头转录因子去磷酸化后转位至细胞核，促进凋亡诱导因子转录发生［3］。Nakahara等［4］研究说明颗粒细胞内凋亡小体数量对IVF结局有预测作用，凋亡小体发生率升高时获卵率下降、空卵泡发生率上升,而EMS患者颗粒细胞中凋亡小体发生率显著高于其他原因不孕患者(输卵管因素、男方因素不孕)。同时，EMS分期升高或伴有内膜异位囊肿时，颗粒细胞凋亡小体发生率进一步增加［4］。此外，流式细胞技术分析EMS患者颗粒细胞所处细胞周期构成比显示，处于S期的颗粒细胞比例升高,而处于G2/M期的细胞比例却显著降低［4］,提示EMS对颗粒细胞增殖的抑制作用。

0-连环蛋白(B-catenin)与下游转录因子结合后促进生存素(Survivin\骨基质形成蛋白4(BMP4)等凋亡抑制因子的表达，从而调节细胞增殖与生存［5］。在缺乏Wntl、Wnt3的保护时，％连环蛋白与蛋白降解复合物结合后发生磷酸化,随后被蛋白酶降解。同为Wnt家族成员的Wnt4.Wnt5对％连环蛋白没有保护作用。在EMS患者颗粒细胞内非0-连环蛋白依赖性的Wnt4和Wnt5表达增加，％连环蛋白依赖性的Wntl表达下降，导致B-连环蛋白及其下游凋亡抑制靶基因表达量均下降［5］。该实验结

果从连环蛋白-Writ信号通路上解释了EMS患者颗粒细胞凋亡增加的原因。

睾酮在卵母细胞成熟及卵泡发育过程发挥重要作用。Yoshihiro等⑹在颗粒细胞系CV434上验证了睾酮能够通过PI3K-Akt-FoxO3a通路抑制细胞凋亡，解释了EMS患者血清及卵泡液中睾酮水平降低与其颗粒细胞凋亡增加的信号机制。

二.EMS患者颗粒细胞氧化应激与炎症反响发生研究显示，内膜异位囊肿周围卵巢皮质氧化应激水平明显高于皮样囊肿或浆液性囊肿［刀。排卵前卵泡颗粒细胞合成代谢旺盛，快速合成类固醇激素导致副产物活性氧(ROS)簇大量堆积，使氧化物与抗氧化物比例失衡，触发细胞氧化应激，而细胞氧化应激是卵母细胞质量下降的原因之一［8］。8-羟基脱氧鸟苜(8-OHdG)是细胞DNA损伤的敏感标志物，反映了细胞氧化应激程度，其含量升高与卵子退化、受精率下降、胚胎发育潜能降低相关，而EMS患者颗粒细胞和卵泡液中8-OHdG水平显著高于输卵管因素、男方因素不孕患者(P0.05)［9］o

一氧化氮(NO)是存在于卵母细胞微环境中的自由基，对卵泡发育和排卵过程都起重要调节作用而在EMS患者卵泡内NO合成代谢失调［10］。

NO与氧气反响形成活性代谢产物过氧化亚硝酸离子（0N00-），促进细胞蛋白质的酪氨酸残基硝化，导致脂质过氧化［11］。在共聚焦显微镜下观察到EMS患者颗粒细胞内ON。。-表达阳性而在对照组颗粒细胞内未检测到。同时，EMS组中未获得妊娠者卵泡液中亚硝酸盐含量高于同组中获得妊娠者［12］。这说明EMS患者颗粒细胞内氮氧化物代谢过强可能是EMS患者卵母细胞活力与发育潜能下降的原因之一。

H2DCF-DA荧光探针可以检测细胞内ROS水平，实验显示EMS患者颗粒细胞内ROS水平是输卵管因素不孕者的4倍［1