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课题3血红蛋白的提取和分离;一、基础知识;(1)离心法
(2)透析法
(3)层析法（如凝胶色谱法）
(4)电泳（常用、简单）;离心法：通过控制离心速率，使得分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。
;;电泳法;3.凝胶色谱法;（3）分离过程;分离过程;4.缓冲溶液;1.凝胶色谱法是根据（）分离蛋白质的有效方法
A.分子的大小B.相对分子质量的大小
C.带电荷的多少D.溶解度;2.用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是
A相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质
B相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质
C相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质
D二者根本无法比较;5.电泳——分离和鉴定蛋白质;在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。;电泳检测结果;1.电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（）的电极移动。
A相同B相反C相对D相向;二、实验操作;1.血液由血浆和各种血细胞组成，其中（）的含量最多。
A白细胞B血小板C红细胞D淋巴细胞
2.为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（）。
A.NaClB.甲苯
C.蒸馏水D.柠檬酸钠;3.蛋白质提取和分离步骤;（一）样品处理;①目的：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化，洗涤次数不可过少。
;②洗涤红细胞过程;初次离心后的结果;3次洗涤后的结果;;阅读思考：
为了加速释放过程，采取了什么措施？;(3)分离血红蛋白溶液：;——甲苯层（无色透明）;将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是（）
A.无色透明的甲苯层
B.脂溶性物质的沉淀层
C.血红蛋白的水溶液
D.其他杂质的暗红色沉淀物;(4)透析——（粗分离）;透析过程动画演示;（二）凝胶色谱操作;①取长40厘米，内径1.6厘米的
玻璃管，两端需用砂纸磨平。;;2.凝胶色谱柱的装填;③???胶色谱柱的装填方法：;;①调整缓冲液面：与凝胶面平齐
②滴加透析样品：用量为1mL
③样品渗入凝胶床：样品完全进入凝胶层
④洗脱：打开下端出口，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每试管5mL，连续收集;注意：正确的加样操作是：
1.不要触及并破坏凝胶面。
2.贴壁加样。
3.使吸管管口沿管壁环绕移动。;常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。;血红蛋白的提取和分离的过程：;思考下面的问题：;观察你处理的血液样品离心后是否分层，如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。;2.你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？;如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。;知识总结
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