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2025年PCR上岗证考试题及答案

一、单项选择题（共20题，每题2分，共40分）

1.以下关于PCR技术基本原理的描述，错误的是：

A.通过高温变性使双链DNA解旋为单链

B.引物与模板的结合遵循碱基互补配对原则

C.TaqDNA聚合酶在72℃时活性最高

D.延伸阶段的主要作用是完成引物的退火

答案：D（延伸阶段是在DNA聚合酶作用下合成新链，退火阶段完成引物结合）

2.实时荧光PCR中，SYBRGreenI染料的作用机制是：

A.特异性结合双链DNA的小沟区域

B.与引物5’端标记的荧光基团发生FRET

C.仅在PCR延伸阶段释放荧光

D.与目标序列的特定区域共价结合

答案：A（SYBRGreenI非特异性插入双链DNA小沟，发出荧光）

3.进行RNA病毒的PCR检测时，关键的预处理步骤是：

A.加入EDTA抑制DNA酶活性

B.使用逆转录酶将RNA转化为cDNA

C.提高变性温度至98℃破坏病毒衣壳

D.用RNaseA消化样本中的杂RNA

答案：B（RNA需先通过逆转录生成cDNA才能进行PCR扩增）

4.引物设计时，若目标序列GC含量为65%，推荐的引物Tm值范围应为：

A.5055℃

B.5560℃

C.6065℃

D.6570℃

答案：C（GC含量高时，引物Tm值需相应提高以保证特异性，通常6065℃较适宜）

5.实验室进行PCR检测时，若阴性对照出现扩增曲线，最可能的原因是：

A.样本核酸提取效率过低

B.扩增仪温度校准偏差

C.气溶胶污染

D.引物与内参基因发生交叉反应

答案：C（阴性对照扩增提示外来核酸污染，气溶胶是常见污染源）

6.数字PCR（dPCR）与实时荧光PCR（qPCR）的主要区别在于：

A.dPCR不需要引物设计

B.dPCR通过终点荧光强度定量

C.qPCR采用绝对定量方法

D.qPCR对仪器温度精度要求更低

答案：B（dPCR通过统计阳性微滴比例实现绝对定量，qPCR通过Ct值相对定量）

7.以下哪种物质会严重抑制TaqDNA聚合酶活性？

A.0.5%TritonX100

B.10mMMg2+

C.50mMKCl

D.血液中的血红蛋白

答案：D（血红蛋白含金属离子螯合物，可强烈抑制Taq酶活性）

8.进行多重PCR时，关键的优化措施是：

A.增加引物浓度至1μM以上

B.统一所有引物的Tm值（±2℃）

C.延长变性时间至2分钟

D.使用高浓度的dNTP（500μM）

答案：B（多重PCR需引物Tm值接近，避免扩增效率差异过大）

9.核酸提取过程中，苯酚氯仿抽提的主要目的是：

A.裂解细胞释放核酸

B.沉淀RNA选择性去除DNA

C.去除蛋白质等有机杂质

D.浓缩核酸提高浓度

答案：C（苯酚氯仿可有效分离蛋白质与核酸，通过离心形成有机相界面水相三层）

10.以下关于PCR扩增仪温度均匀性的要求，正确的是：

A.各孔间温度差异应≤±0.5℃

B.仅需保证95℃变性温度的准确性

C.4℃保温时温度偏差不影响结果

D.温度均匀性对终点PCR无影响

答案：A（温度均匀性直接影响扩增效率，ISO标准要求各孔间差异≤±0.5℃）

11.检测人乳头瘤病毒（HPV）的分型PCR中，常用的靶基因是：

A.16SrRNA基因

B.L1衣壳蛋白基因

C.逆转录酶基因

D.核衣壳蛋白基因

答案：B（HPVL1基因保守且具有型特异性，是分型检测的常用靶标）

12.以下哪种情况会导致PCR产物出现非特异性条带？

A.模板DNA浓度过低

B.退火温度过高

C.引物浓度过高

D.dNTP浓度低于50μM

答案：C（引物浓度过高易引发引物二聚体或非特异性结合）

13.实时荧光PCR的Ct值与初始模板量的关系是：

A.Ct值越大，初始模板量越多

B.Ct值与初始模板量呈指数正相关

C.Ct值与初始模板量的对数呈线性负相关

D.Ct值与初始模板量无直接关联

答案：C（Ct值=log(初始模板量)×(k)+b，k为扩增效率相关常数）

14.实验室开展PCR检测前，需进行的方法学验证不包括：

A.精密度（重复性、再现性）

B.分析灵敏度（最低检测限）

C.仪器外观清洁度

D.分析特异性（交叉反应）

答案：C（方法学验证需涵盖性能指标，仪器清洁度属于日常维护范畴）

15.以下关于内参基因