2020年高三生物一轮复习备战2021-必备知识梳理-第26讲-微生物的培养和分离.docxVIP

备战2021高三生物一轮复习必备知识梳理

第26讲微生物的培养和别离

考点一微生物的别离和培养

1.培养基

(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

(3)种类

①按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。

②按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。

③按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。

类型

实例

选择培养基

培养基中参加青霉素别离得到酵母菌和霉菌

培养基中参加高浓度的食盐用于别离得到金黄色葡萄球菌

以尿素作为唯一氮源的培养基用于别离分解尿素的细菌

不添加氮源的培养基用于别离固氮微生物

石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，到达别离并消除污染石油的微生物的目的

培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物

鉴别培养基

伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈黑色)

2.无菌技术常用方法

3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。

4.纯化大肠杆菌的方法

(1)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基外表连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的外表。

①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要将接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环。

每次灼烧目的

第一次操作

每次划线之前

划线结束

目的

杀死接种环上原有的微生物

杀死上一次划线后接种环上残留的菌种，使下一次划线的菌种直接来源于上一次划线的末端，使每次划线菌种数目减少

杀死接种环上残存的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者

②灼烧接种环后，应待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

③第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

(2)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的外表，进行培养。

(3)平板划线法和稀释涂布平板法的优点和缺点

方法

平板划线法

稀释涂布平板法

优点

可以观察菌落特征，对混合菌进行别离

可以计数，可以观察菌落特征

缺点

不能计数

较麻烦，平板不枯燥效果不好

5.菌种的保存方法

(1)对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

(2)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

考点二某种微生物数量的测定

1.统计菌落数目的方法

(1)显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

②方法：血细胞计数板法。

a.结构：常用的是方格的计数板(如上图)。每个计数板上有两个计数室，每个计数室上刻有9个大方格，其中只有中间的大方格为计数室，大方格的长和宽各为1mm，深度为，其容积为3；大方格内分为16(25)中格，每一中格又分为25(16)小格，即大方格是由400个小方格组成的。

b.操作：将清洁枯燥的血细胞计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的菌液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，充满计数室。

c.计数：在显微镜下计数4~5个中方格内的菌体数，求出每个小方格所含有的菌体的平均数，按照以下公式计算：每毫升原液含有的菌体数=每小格平均菌体数×400×104×原液被稀释的倍数。

③缺点：不能区分死菌与活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法)

原理：当样品的稀释度足够高时，培养基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

2.土壤中分解尿素的细菌的别离与计数

工程

内容

实验原理

(1)能合成脲酶的细菌才能分解尿素

(2)配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌

数量统计

(1)直接计数法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板)

(2)间接计数法：稀释涂布平板法

实验流程

土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数

(1)统计菌落数目一般用稀释涂布平板法。

(2)统计菌落数目时，培养基外表生长的1个菌落，来源于样品稀释液中的1个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

(3)从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算公式：每克样品中的菌落数=(平均菌落数÷涂布的稀释液体积)×稀释倍数。

(4)设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

1.利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度。

2.微生物的计数要求制作多个平板，且每个平板上能长出30~300个菌落。

3.尿素分解菌运用了选择培养基，所用的培养基中尿素是唯一的氮源。