17.Chapter17-基因工程和蛋白自工程.pptVIP

第十七章基因工程和蛋白质工程;第一节基因工程的概念;二、限制酶(限制性内切酶);一)、限制酶的命名和意义;二）、限制酶的分类;三）、限制酶的识别及切割位点;5′—G—A—A—T—T—C—3′;;三、基因载体;特点:

细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子；

质粒是基因工程中最常用的运载体；

最常用的质粒是大肠杆菌的质粒；

存在于许多细菌及酵母菌等生物中；

质粒的存在对宿主细胞无影响；

质粒的复制只能在宿主细胞内完成。;细菌染色体;;二）、噬菌体和病毒;噬菌体DNA;第二节基因工程的基本步骤;基本步骤：;二、外源DNA与载体连接

三、重组DNA导入宿主细胞

转化、转导、转染

四、重组体的筛选

1、插入失活法

2、核酸杂交法

3、免疫测定法

4、PCR扩增法;在特殊培养基上（如含有青霉素）筛选目的细菌;五、克隆基因的表达

真核生物基因转移到原核生物表达，必须考虑：

1、真核基因与原核基因结构上的差异。

2、真核基因与原核基因具有不同的启动子，RNA聚合酶的结构也不同。

3、真核mRNA5’端有甲基化鸟苷“帽”结构，3’端有poly“尾”结构。细菌没有。

4、翻译中，真核mRNA无Shine-Dallgarno序列，不能很好的通细菌核糖体结合。

5、细菌的蛋白酶，能识别外来真核基因所产生的蛋白质分子，并降解之。;第三节蛋白质工程;二、蛋白质工程的一般技术;三、蛋白质工程的应用示例