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不结球白菜开花基因BcMAF2的低温应答及BcFT互作蛋白筛选：揭示开花调控的分子奥秘

一、绪论

1.1研究背景与目的

不结球白菜（BrassicacampestrisL.ssp.chinensisMakino），作为十字花科芸薹属白菜的一个变种，在中国蔬菜产业中占据着举足轻重的地位。它原产于中国，有着悠久的栽培历史，其丰富的营养价值、清爽的口感以及多样的烹饪方式，深受广大消费者的喜爱。从种植面积来看，不结球白菜的种植规模持续扩大，已成为我国第三大蔬菜作物，为保障蔬菜市场的稳定供应发挥了重要作用。

开花作为植物生长发育过程中的关键阶段，是植物从营养生长向生殖生长转变的重要标志。对于不结球白菜而言，开花时间的精准调控不仅直接影响其产量和品质，还与种子生产密切相关。在实际生产中，不同品种的不结球白菜开花时间存在显著差异，这给种植户的管理和生产带来了一定的挑战。同时，在杂交育种过程中，花期能否相遇是决定育种成败的关键因素之一，而一些晚花品种的花期过长，严重影响了育种周期，限制了新品种的选育和推广。

在众多影响不结球白菜开花的因素中，低温是一个重要的环境信号。许多植物在生长过程中需要经历一定时期的低温处理才能顺利开花，这种现象被称为春化作用。不结球白菜也存在类似的春化需求，低温诱导能够促使其体内发生一系列复杂的生理生化变化，从而启动开花进程。深入研究不结球白菜开花基因对低温的应答机制，有助于我们更好地理解其开花调控的分子基础，为通过人工调控花期来提高产量和品质提供理论依据。

此外，BcFT基因作为不结球白菜开花调控网络中的关键基因，编码的蛋白在开花信号传导过程中发挥着核心作用。然而，目前对于BcFT蛋白与其他蛋白之间的相互作用关系还知之甚少。筛选与BcFT相互作用的蛋白，能够进一步揭示BcFT介导的开花信号传导途径，完善不结球白菜开花调控的分子机制。

本研究旨在深入探究不结球白菜开花基因BcMAF2对低温的应答机制，以及筛选与BcFT相互作用的蛋白，从而为揭示不结球白菜开花调控的分子机制提供重要的理论依据，为不结球白菜的遗传改良和品种选育提供新的思路和方法。具体而言，通过分析BcMAF2在不同低温处理条件下的表达模式，明确其对低温的响应规律；利用分子生物学技术，筛选与BcFT相互作用的蛋白，并对其功能进行初步分析。

1.2国内外研究现状

在不结球白菜开花基因的研究领域，国内外学者已取得了一系列重要成果。在国内，南京农业大学的科研团队通过对不结球白菜进行不同浓度的乙烯处理，发现乙烯能够抑制不结球白菜开花。进一步的研究结合实验室前期成果，鉴定出一个乙烯响应因子BcERF070，其表达量可被乙烯诱导。通过VIGS沉默BcERF070，证实了其参与乙烯延迟开花的调控路径。此外，采用Y2H、BiFC、LCI、Pull-down和Co-IP等技术手段，筛选到BcERF070的互作蛋白BcMLP328，发现该基因能够促进不结球白菜开花。以BcMLP328作为诱饵，又筛选获得其互作基因BcbHLH30，通过多种实验方法证实BcLFY是BcbHLH30的下游靶基因，其转录会被BcbHLH30增强，从而揭示了乙烯响应因子BcERF070抑制不结球白菜开花的分子机制。

同时，国内的另一项研究以不结球白菜突变系和保持系的早期花蕾总RNA为研究对象，利用同源克隆基因的方法，克隆出2个AP3同源基因BcAP3-1和BcAP3-2。通过生物信息学分析和半定量PCR技术，对这2个基因的核苷酸和蛋白氨基酸序列结构、组成以及在不同发育时期及不同组织部位的表达进行了研究，发现BcAP3-2基因可能与不结球白菜雄蕊瓣化性状密切相关。

在国外，相关研究主要集中在拟南芥等模式植物的开花调控机制上，虽然不结球白菜与拟南芥同属十字花科，但由于物种差异，拟南芥的研究成果不能直接应用于不结球白菜。不过，这些研究为不结球白菜开花基因的研究提供了重要的理论基础和研究思路。例如，对拟南芥中开花相关基因的功能研究，为在不结球白菜中寻找同源基因并探究其功能提供了参考。

尽管目前在不结球白菜开花基因的研究方面已经取得了一定的进展，但仍存在许多不足之处。一方面，对于不结球白菜开花基因对低温应答机制的研究还不够深入，尤其是在基因表达调控和信号传导途径方面，还有许多未知的环节有待进一步探索。另一方面，虽然已经鉴定出一些与不结球白菜开花相关的基因，但对于这些基因之间的相互作用关系以及它们在复杂的开花调控网络中的具体作用，还缺乏系统的认识。此外，在筛选与关键开花基因相互作用的蛋白方面，研究还相对较少，这限制了我们对开花调控分子机制的全面理解。

1.3研究方法与技术路线