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第三章
细胞工程的技术基础;第一节基本设备
第二节基本技术;第一节基本设备;5;6;培养箱;8;光照培养室;显微镜室;14;15;16;17;18;●消毒灭菌设备：蒸汽压力消毒器、电热干燥箱、过滤除菌装置、离子发生器、耐酸耐碱容器、吸管自动冲洗器、超声波清洗器；;灭菌室;23;24;●配液用具：水纯化装置、离子交换树脂装置、电子天平、磁力搅拌器、蒸发器等；
●制备、培养、保存细胞用品：解剖器具、80～200目尼龙网或不锈钢网、血细胞计数板、培养器皿、细胞培养板（不同孔数）、涡流混悬器、恒温水浴振荡器、细胞冻存管、玻璃安瓿、真空低温干燥器、厚质玻璃容器等。;27;28;30;31;32;33;34;35;二、器材处理;一、无菌技术
1.各种灭菌方法及其适用范围
A湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌法、常压蒸汽灭菌法、间歇灭菌法）
B干热灭菌法（火焰灭菌、干热灭菌）
C电离辐射灭菌
D紫外线杀菌
E过滤除菌
F化学杀菌
G熏蒸灭菌法;2.无菌操作过程
A清洗
玻璃器皿的清洗
实验材料的清洗
B灭菌
※培养材料的灭菌
以药剂灭菌法为主
主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药剂的耐受力;39;40;※培养基灭菌
高压蒸汽灭菌
过滤灭菌
C接种
经过表面灭菌的材料，按不同的要求，经过剪切、整理后，移植到培养基上培养的过程。
※接种室（无菌操作室）的灭菌
※接种台的灭菌
※工作人员注意事项;3.实验室生物安全
概念：指那些用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的保护原则、技术及实践。
传染性微生物的危险程度分4级
——1级、2级、3级、4级
生物安全水平（BSL）相应的也分为4级
——BSL1（基础实验室）
BSL2（基础实验室）
BSL3（防护实验室）
BSL4（最高防护实验室）;二、细胞制备：
机械分散法淋巴细胞分离：肝素抗凝血剂+Hanks
稀释→分级分离→吸取→加其它培养液
单细胞悬胰蛋白酶细胞T、B细胞分离：尼龙棉柱过滤B细胞粘附
液的制备酶消化法分离法T细胞过滤
胶原酶CD4/CD8细胞分离：SephadaG-10柱或
流式细胞分选仪
螯合剂分散法单核/巨噬细胞分离淋巴细胞不粘，
（与玻面粘附）单核/巨噬细胞粘附;三、细胞计数法：血细胞计数板或器细胞分装；
四、细胞培养与传代
五、细胞形态学检查法：
一般形态观察
●利用倒置显普通染色观察（Giemsa染核）
微镜观察法特殊染色法：DNA（Feulgen反应）、
DNA-RNA（甲基-派洛宁）、
糖（PAS）、脂（苏丹红II）、
线粒体（詹纳斯绿B液）、
叶绿体（吖啶橙）
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