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斜入射光反射差法：开启无标记高通量生物芯片检测新时代

一、引言

1.1研究背景与意义

在生命科学研究领域，生物分子的检测及其相互作用研究始终占据着核心地位，是探索生命奥秘、攻克疾病难题的关键环节。生物芯片技术作为一种革命性的研究工具，自20世纪九十年代问世以来，凭借其能够在微小的芯片上集成数以万计的生物分子探针，实现对大量生物样品的并行检测，极大地提高了实验效率，推动了生命科学研究从传统的单一检测模式向高通量、大规模分析的方向迈进，成为了生命科学研究中最为活跃的前沿领域之一。例如在基因表达谱分析中，基因芯片可以同时检测成千上万个基因的表达水平，帮助科研人员快速了解细胞在不同生理病理状态下的基因调控网络；在蛋白质组学研究里，蛋白芯片能够对多种蛋白质进行同步分析，为揭示复杂的细胞信号通路和疾病机制提供了有力支持。

然而，当前生物芯片检测技术仍以荧光标记法为主导，虽然荧光标记法具有较高的灵敏度，但其检测过程涉及复杂的标记步骤，需要对生物分子进行荧光标记，这不仅耗时费力，增加了实验成本，而且标记过程可能会对生物分子的天然结构和活性产生影响，从而干扰检测结果的准确性，导致对生物分子真实特性和相互作用的误判。此外，荧光标记法还存在荧光信号易受环境因素干扰、背景噪声较高等问题，限制了其在一些对检测精度和稳定性要求极高的研究中的应用。

斜入射光反射差（Oblique-IncidenceReflectivityDifference，OIRD）法作为一种新兴的无标记光学检测技术，近年来在生物芯片检测领域展现出了巨大的潜力。该技术的基本原理基于光的偏振特性，当一束在p偏振和s偏振之间周期性变化的调制光以特定角度斜入射到生物芯片表面时，由于生物芯片表面生物分子的吸附、解吸附、结构变化等引起的介电常数或尺度在空间与时间上的细微改变，会导致反射光的s和p两个偏振分量产生不同程度的变化，通过精确测量这两个偏振分量的差值，就能获取生物芯片表面的微观变化信息，实现对生物分子相互作用的无标记、实时在线监测。与传统的荧光标记检测技术相比，OIRD法无需对生物分子进行标记，避免了标记过程对生物分子的干扰，能够更真实地反映生物分子的原始状态和相互作用过程；同时，该技术具有较高的检测灵敏度和分辨率，能够检测到生物芯片表面极其微小的变化，且不受荧光背景噪声的影响，数据准确性和可靠性更高；此外，OIRD法还具备高通量检测能力，能够在短时间内对大量生物样品进行快速分析，满足现代生命科学研究对高效、准确检测技术的迫切需求。

本研究聚焦于斜入射光反射差法无标记高通量检测生物芯片的探索，旨在深入剖析该技术的检测原理，通过优化实验参数和系统设计，进一步提高其检测性能，并将其广泛应用于生物分子相互作用研究、疾病诊断标志物筛选、药物研发等多个关键领域。这不仅有助于推动生物芯片检测技术的创新发展，为生命科学研究提供更加精准、高效的检测手段，还将对疾病的早期诊断、个性化治疗以及新药研发等产生深远的影响，具有重要的科学意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

在国外，斜入射光反射差法无标记高通量检测生物芯片的研究起步较早，取得了一系列具有开创性的成果。美国、欧盟等地区的科研团队在基础理论研究方面深入探究了OIRD技术的光学原理和信号响应机制，为该技术的发展奠定了坚实的理论基础。例如，[具体文献1]通过理论模型和实验验证，详细分析了不同生物分子层结构对反射光偏振分量的影响规律，揭示了OIRD信号与生物分子相互作用之间的内在联系；在应用研究领域，国外团队已成功将OIRD技术应用于药物筛选、病毒检测等多个方向。[具体文献2]利用基于OIRD技术的生物分子相互作用检测平台，从大量小分子化合物中筛选出了与特定靶标蛋白具有强结合力的潜在药物分子，显著提高了药物研发的效率和成功率；在病毒检测方面，[具体文献3]构建了基于OIRD的病毒检测芯片，实现了对多种病毒的快速、灵敏检测，为传染病的早期诊断和防控提供了新的技术手段。

国内对斜入射光反射差法检测生物芯片的研究也呈现出蓬勃发展的态势。复旦大学费义艳课题组发展了基于生物芯片和斜入射光反射差技术的无标记高通量生物分子相互作用检测平台，并在药物筛选、病毒检测等领域开展了广泛研究。2019年，该课题组与复旦大学生科院合作，开创性地提出了基于自噬小体绑定化合物的药物研发原创概念，并巧妙地通过基于化合物芯片和前沿光学方法（斜入射光反射差技术）的筛选，发现了特异性降低亨廷顿病致病蛋白的小分子化合物，相关研究成果发表于《Nature》。此外，国内其他科研团队也在积极探索OIRD技术在生物芯片检测中的应用，在检测系统的优化、生物芯片的制备工艺改进等方面取得了一定的进展。

尽管国内外在斜