第三章-毛细管电泳分离技术.pptVIP

第三章毛细管电泳分离技术;第一节概述;发展历程;20世纪70年代在HPLC的推动下，电泳分离技术成为了一种“灰姑娘”式的技术。

1981年，Jorgenson等[1]介绍了毛细管区带电泳技术。

1984年Terabe等提出的胶束电动毛细管色谱。

1987年，Hjerten建立了毛细管等电聚焦。

1987年，由Chohen等提出了毛细管凝胶电泳。

1991年，Monnig等[2]首次提出了高速毛细管电泳。

目前，毛细管电泳已广泛应用于氨基酸、肽、蛋白质和核酸等离子型生物大分子的分离分析，加入表面活性剂还可以扩大到中性粒子，甚至应用到细胞和病毒等的分离。同时，在小分子化合物的分离分析方面也取得了重大进展。

;第二节毛细管电泳基本原理;（一）电泳和电渗;;;;;当把样品从阳极端注入毛细管时，假设A物质为负离子，B物质为正离子，则带不同电荷的离子将按下面的速度迁移到阴极，到时间t时，A、B物质已经分离了。

正离子：νt=νeo+ν+

中性分子：νt=νeo

负离子：νt=νeo-νˉ;;(二)分离速率;在任何给定的时间内要获得最高的理论塔板数，分离电压与毛细管长度的比例应该最大，也就是说在只考虑溶质纵向扩散的前提下，采用尽可能高的分离电压和短的毛细管，可以实现高柱效和快速分离。高的电渗流同样可以提高分析速度和柱效。;影响柱效的因素;毛细管在高电压场下产生的焦耳热G

G=κ·(V/L)2·πr2

κ－电导率；r－毛细管内径

焦耳热随着分离电压增大和毛细管的缩短而增大。焦耳热过大会造成峰扩展、变形。

补救措施：

采用小内径毛细管可以降低焦耳热。

采用低电导率的缓冲溶液。如具有高的相对分子质量、小电荷的溶液或窄pH范围的两性电解质。;要在维持高效情况下加快CE的分离速度，可以采用以下几种方法：

①短而窄内径的分离毛细管；

②高分离电压；

③高电渗流。

另外，对于带负电荷的分离物，通常在缓冲溶液中加入阳离子表面活性剂，通过改变EOF的方向来提高分离速度。;(三)分离效率和分辨率;;（四）影响分辨率的因素;1.电解效应及缓冲溶液的选择;2.电压的影响;3.黏度;4.区域的畸变;（五）影响电泳淌度的因素;1.带电分子的本质;2.电泳系统的性质;（1）电泳缓冲液的离子构成;（2）温度;（3）电泳缓冲液的pH值;（4）操作电压;（5）载体介质;二、毛细管电泳的分离模式;第三节毛细管电泳装置;高压电源可对毛细管施加5~50kV电压，操作电压一般控制在5~30kV范围。

CE通常使用内径10~100μm、长12~120cm(内涂聚酰亚胺)弹性融凝石英毛细管，毛细管的两端分别浸泡在含有缓冲溶液的贮液槽中，毛细管内也充满同样的缓冲溶液。

被分离试样可以采用重力法、抽真空法或电迁移法等多种进样方式由毛细管一端进入。;一、毛细管电泳的进样技术;光学门进样装置示意图;流动门进样装置示意图;二、毛细管电泳检测器;检测器类型;第四节毛细管电泳技术的应用研究进展;一、毛细管电泳技术的应用;二、毛细管电泳技术的发展方向;思考题