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胰蛋白酶检验标准操作程序

文件目录：

TOC\o1-1\h\z\u295571.目的 2

122722.适用范围 2

269403.职责 2

142194.定义 2

191255.主要内容 2

43276.派生记录 5

44697.相关文件 5

245288.附件 6

267199.修订历史 6

1.目的

为规范和指导胰蛋白酶的检验操作步骤及技术要求。确保实验结果的准确性，特制订本规程。

2.适用范围

本程序适用于胰蛋白酶的检验。

3.职责

质量控制室人员：负责该程序的起草

质量控制室主任：负责该程序的审核

质量总监：负责该程序的批准

4.定义

不适用

5.主要内容

5.1引用标准

《胰蛋白酶内控质量标准》

5.2品名

胰蛋白酶

Yidanbaimei

Trypsin

5.3制法要求

本品应从检疫合格的牛、羊或猪胰中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。

5.4性状

本品为白色或类白色结晶性粉末。

5.5鉴别

取本品约2mg，置白色点滴板上，加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐试液0.2ml，搅匀，即显紫色。

5.6检查

5.6.1酸度

取本品，加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，参见《pH值测定法标准操作规程》，依法测定，pH值应为5.0～7.0。

5.6.2溶液的澄清度

取本品，加0.9%氯化钠溶液溶解并制成每1ml中含10mg的溶液，参见《澄清度检查法标准操作规程》，依法检查，溶液应澄清。

5.6.3糜蛋白酶

底物溶液的制备取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯23.7mg，置100ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1ml，混合，pH值为7.0）50ml，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀。冰冻保存，但不得反复冻融。

供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，加0.001mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.25mg的溶液。

测定法取底物溶液2.0ml、0.001mol/L盐酸溶液0.2ml与上述磷酸盐缓冲液（pH7.0）1ml，混匀，作为空白。取供试品溶液0.2ml与底物溶液（预热至25℃±0.5℃）3.0ml，立即计时并摇匀，使比色池内的温度保持在25℃±0.5℃，参见《紫外-可见分光光度法标准操作规程》，在237nm的波长处，每隔30秒读取吸光度，共5分钟，每30秒钟吸光度的变化率应恒定，且恒定时间不得少于3分钟。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟内成直线部分的吸光度，按下式计算。

计算公式

P=

A2—A1

×

2500

0.0075T

W×供试品效价（u/mg）

式中P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量，单位；

A2为直线上开始的吸光度；

A1为直线上终止的吸光度；

T为A2至A1读数的时间，分；

W为测定液中含供试品的量，mg；

0.0075为在上述条件下，吸光度每分钟改变0.0075，即相当于1个糜蛋白酶单位。

结果判定每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。

允许误差参见《检验工作管理程序》

5.6.4干燥失重

取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，参见《干燥失重测定法标准操作规程》，依法测定，减失重量不得过5.0％。

5.6.5效价测定

底物溶液的制备取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐85.7mg，加水溶解使成100ml，作为底物原液；取10ml，用磷酸盐缓冲液（取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液13ml与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液87ml混合，pH值为7.6）稀释成100ml，照紫外-可见分光光度法《紫外-可见分光光度法标准操作规程》，恒温于25.0℃±0.5℃，以水作空白，在253nm的波长处测定吸光度，必要时可用上述底物原液或磷酸盐缓冲液调节，使吸光度在0.575～0.585之间，作为底物溶液。制成后应在2小时内使用。

供试品溶液的制备精密称取本品适量，加0.001mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含50～60胰蛋白酶单位的溶液。

测定法取底物溶液3.0ml，加0.001mol/L盐酸溶液200ul，混匀，作为空白。另取供试品溶液200ul，加底物溶液（恒温于25.0℃±0.5℃）3.0ml，立即计时，混匀，使比色池

内的温度保持在25℃±0.5℃，照紫外-可见分光光度法（《紫外－可见分光光度法标准操作规程》），在253nm的波长处，每隔30秒钟读取吸光度，共5分钟。以吸光度为纵坐标，时间为横坐