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人Foxp3基因修饰NKL/NK-92细胞系：特性解析与应用前景探究

一、引言

1.1研究背景

癌症作为全球范围内严重威胁人类健康的重大疾病，其发病率和死亡率一直居高不下，给患者家庭和社会带来了沉重的负担。据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，2020年全球新增癌症病例1929万例，癌症死亡病例996万例。尽管目前临床上针对癌症的治疗手段众多，包括手术、化疗、放疗、靶向治疗等，但对于一些晚期癌症患者或对传统治疗方法耐药的患者，这些治疗手段的效果往往不尽人意，患者的预后仍然较差。因此，寻找一种更加有效的癌症治疗方法迫在眉睫。

免疫治疗作为一种新兴的癌症治疗方法，近年来在癌症治疗领域取得了显著的进展，为癌症患者带来了新的希望。自然杀伤（NK）细胞作为人体免疫系统的重要组成部分，是机体抵御肿瘤和病毒感染的第一道防线，在免疫治疗中发挥着关键作用。NK细胞无需预先接触抗原，就能直接识别和杀伤靶细胞，如肿瘤细胞和病毒感染细胞，同时还能分泌多种细胞因子和趋化因子，调节免疫系统的功能。与传统的T细胞免疫治疗相比，NK细胞免疫治疗具有独特的优势。首先，NK细胞的杀伤活性不受主要组织相容性复合体（MHC）限制，这使得NK细胞能够识别和杀伤那些由于MHC分子表达缺失或下调而逃避免疫监视的肿瘤细胞。其次，NK细胞的制备相对简单，来源广泛，可以从外周血、脐带血、骨髓等多种组织中获取，也可以通过细胞系的形式进行扩增和培养，这为NK细胞的大规模临床应用提供了便利。此外，NK细胞在体内的存活时间较短，一般不会引起严重的免疫相关不良反应，安全性较高。

NK-92细胞系作为一种常用的NK细胞系，自1992年从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞中衍生而来后，在癌症免疫治疗领域得到了广泛的研究和应用。NK-92细胞对多种恶性细胞具有强大的细胞毒性，铬释放试验表明它能有效地杀死K562细胞和Daudi细胞等肿瘤细胞系。而且，经过照射处理以防止其增殖的NK-92细胞，可以在体外对血液中的白血病细胞进行免疫清扫，且不会对血细胞的正常功能造成危害。在临床研究中，NK-92细胞也展现出了一定的治疗潜力。然而，NK-92细胞在体外培养过程中存在一些局限性，其中最为突出的问题是其活性和功能会随着培养时间的延长而逐渐减弱。这可能是由于长期的体外培养环境与体内环境存在差异，导致细胞的代谢、信号传导等生理过程发生改变，进而影响了细胞的活性和功能。细胞活性和功能的减弱会直接降低NK-92细胞在癌症免疫治疗中的效果，限制了其在临床治疗中的广泛应用和进一步发展。因此，如何提高NK-92细胞在体外培养中的活性和功能，增强其免疫反应和杀伤作用，成为了当前癌症免疫治疗领域亟待解决的重要问题。

为了解决NK-92细胞在体外培养中存在的问题，科研人员进行了大量的研究和探索，其中基因修饰技术为改善NK-92细胞的生物学特性提供了新的思路和方法。人Foxp3基因作为一种重要的免疫调节基因，其编码的Foxp3蛋白是调节性T细胞（Treg细胞）的标志性转录因子，在免疫调节过程中发挥着核心作用。Treg细胞能够通过多种机制抑制自身免疫反应，维持机体的免疫平衡。在NK-92细胞中引入人Foxp3基因构建体，有望使NK-92细胞获得类似Treg细胞的免疫调节功能。这种免疫调节功能可能有助于细胞减少自发性杀伤作用和过度的免疫反应，从而在临床治疗中提高细胞的安全性和可靠性。同时，通过基因修饰技术对NK-92细胞进行改造，还可能进一步激活NK细胞的功能。有研究利用信号转导分子，如IKBKE等，并结合Cas9基因编辑技术，增强了NK-92细胞对干扰素的敏感性和抗病毒作用。这些改造后的细胞能够更快地产生干扰素，加速NK细胞的杀伤作用，有效地阻断癌细胞的增长和扩散。而且，人Foxp3基因修饰的NK-92细胞在表型和生长特性方面也表现出了一定的优势。与普通的NK-92细胞相比，这些细胞的生长速度更快，存活率更高，细胞形态更为稳定，在长期的体外保存中能够保持高度的稳定性和治疗特性。这些优势为抗癌疗法的研究和临床应用提供了良好的基础和广阔的前景。

1.2研究目的和意义

本研究旨在深入探究人Foxp3基因修饰的NK-92细胞系的生物学特性，通过一系列实验和分析，全面揭示该细胞系在免疫调节、杀伤能力、增殖能力、表面受体表达以及细胞因子分泌等方面的特性，为其在癌症治疗和免疫调节领域的进一步研究和应用提供坚实的理论基础和实验依据。

具体而言