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基于FLS酶高效表达的光催化多酶固定CO2系统构建及性能研究

一、引言

1.1研究背景与意义

随着全球工业化进程的加速，二氧化碳（CO_2）的排放量急剧增加，由此引发的温室效应等环境问题已成为全球关注的焦点。据国际能源署（IEA）的数据显示，2022年全球CO_2排放量达到了368亿吨，创历史新高。过量的CO_2排放导致全球气温上升、冰川融化、海平面上升等一系列严重后果，对生态系统和人类社会的可持续发展构成了巨大威胁。同时，传统化石能源的日益枯竭也促使人们积极寻求可持续的能源解决方案。在这样的背景下，CO_2的固定和转化技术显得尤为重要。

光催化多酶固定CO_2系统作为一种新兴的技术，结合了光催化和酶催化的优势，为CO_2的固定提供了一种温和、高效且环境友好的途径。与传统的化学固定方法相比，该系统具有反应条件温和、能耗低、选择性高、可在常温常压下进行等显著优势。例如，在传统的CO_2加氢合成甲醇的过程中，通常需要高温高压的条件，且催化剂的选择性和活性有限；而光催化多酶固定CO_2系统可以在温和的光照条件下，利用酶的特异性催化作用，将CO_2高效地转化为各种有用的化学品，如甲醇、甲酸、乙酸等。这种技术不仅能够有效减少CO_2的排放，还能实现碳资源的循环利用，为解决能源和环境问题提供了新的思路和方法。

在光催化多酶固定CO_2系统中，黄酮醇合成酶（FLS）起着关键作用。FLS是黄酮类化合物合成途径中的关键酶，它能够催化二氢黄酮醇转化为黄酮醇。黄酮醇作为一种重要的次生代谢产物，具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，在医药、食品、化妆品等领域有着广泛的应用。同时，FLS的高效表达能够提高黄酮醇的合成效率，进而增强系统对CO_2的固定能力。研究表明，黄酮醇可以作为电子受体参与光催化反应，促进光生电子的转移和利用，从而提高光催化多酶固定CO_2系统的效率。此外，FLS还可以通过调节植物体内的黄酮类化合物含量，影响植物的光合作用和生长发育，进一步间接影响CO_2的固定和转化。因此，深入研究FLS酶在光催化多酶固定CO_2系统中的作用机制，实现FLS酶的高效表达，对于构建高效的光催化多酶固定CO_2系统具有重要的理论和实际意义。

1.2国内外研究现状

在光催化多酶固定CO_2系统方面，国内外学者已经开展了大量的研究工作。刘俊秋教授、孙鸿程副教授报道了一类基于多级MOF孔道结构的酶时空封装用于高效辅因子依赖的光-酶耦合CO_2固定，通过创新的时空封装策略，将多个酶在MOF内精确排列，成功构建了多酶级联的光酶耦合辅因子再生系统，用于辅因子依赖的光酶耦合CO_2转化，有效提升了CO_2的转化效率。南京大学邹志刚院士和周勇教授课题组设计合成了单原子In^{\delta+}-N_4修饰的氮化碳（C_3N_4）纳米片，有效调控了C_3N_4的层间距，实现了CO_2/CO的高效光转化，为光催化CO_2还原提供了新的材料和方法。北京理工大学张加涛教授团队受到自然界生物酶催化中心多级结构与协同催化原理的启发，基于ZnSe二维量子阱构建了NH_2…Cu-Se(-Zn)多功能协同催化中心，在光催化二氧化碳还原制乙醇反应中实现了5.5mmol/g/h的转化速率，相较目前同类研究水平提高了一至三个数量级，且选择性高达98.2\%，为光催化CO_2还原制高附加值能源燃料提供了新的设计思路。

在FLS酶表达方面，茶树黄酮醇合成酶基因克隆及原核表达研究通过RT-PCR从龙井43茶树叶片中获取目的基因，构建pET-28a重组表达载体，利用威尼德GenePulser830方波型电穿孔仪转化大肠杆菌BL21(DE3)，实现目的蛋白高效诱导表达，为茶树次生代谢调控研究提供了技术支撑。枇杷黄酮醇合成酶FLS基因表达与黄酮醇积累的相关性分析以解放钟枇杷为材料，分析果实发育过程中黄酮醇合成酶（FLS）基因表达与黄酮醇积累的相关性，发现黄酮醇合成酶FLS基因的表达量变化与黄酮醇含量变化趋势相似，且二者呈显著正相关，表明FLS基因对枇杷果实黄酮醇的合成具有明显的正调控作用。

然而，当前研究仍存在一些不足和空白。在光催化多酶固定CO_2系统中，酶与光催化剂之间的界面兼容性和协同作用机制尚不完全清楚，这限制了系统效率的进一步提高。此外，多酶级联反应中的底物扩散限制、酶活性的稳定性以及辅因子的再生等问题也亟待解决。在FLS酶表达方面，虽然已经在一些植物中实现了FLS酶的表达，但表达效率和活性仍有待提高，且对于FLS酶在光催化多酶固定CO_2系统中的作用机制研究还不够深入。因此，进一步深入研究光催化多酶固定CO_2系统的作用机制，优化FLS酶的表达和性能，对于推动该领域的发展具有重