第五章氨基酸、蛋白质提取工艺特性.pptVIP

第五章氨基酸和蛋白质提取工艺特性;一、氨基酸的特性;

氨基酸在适当的条件下，能进行有机胺或有机酸的几乎全部反应。与一般的酸和碱可生成稳定的盐，大部分均能溶于水，但与重金属如铜、银、汞等制成的络合物不溶于水，也可利用这种性质来分离氨基酸。;三、氨基酸的分离;②成盐分离法:利用某些酸性氨基酸与某些金属化合物，如氢氧化钡、氢氧化钙生成难溶性盐，或某碱性氨基酸与一般酸生成盐，从而与其他未成盐的氨基酸分离。如南瓜子中的南瓜子氨基酸是通过与过氯酸生成结晶性盐而分出的。

③晶析法:利用不同氨基酸等电点不同，进行晶析结晶分离。例如在含有亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的溶液，其pH值为1.5～2.0时，浓缩先晶析出亮氨酸，它的母液加盐酸后再浓缩晶析出异亮氨酸，最后母液中回收缬氨酸。;四、氨基酸、肽的鉴别反应

①茚三酮(Ninhydrin)反应：所有的a-氨基酸及含有a-氨基酸的肽类和蛋白质都能和该试剂反应呈现兰色或兰紫色。必要时加热，反应可在滤纸上进行。

(2)吲哚醌(Isatin）试剂反应：不同的氨基酸与吲哚醌试剂反应，能显示不同的颜色。由于试剂的配制方法不同，对同一种氨基酸所显示的颜色也往往有差异。吲哚醌不仅可用于氨基酸的显色，而且从其颜色的区别，可以帮助辨认氨基酸。显色不稳是其特点，氨对显色无干扰。;五、氨基酸提取实例;(3)一次脱色称取胱氨酸粗品(I)150公斤，加入10mol/L盐酸约90公斤、水360公斤，加热至65～70℃，搅拌溶解半小时，再加入活性炭12公斤，升温到80～90℃，保温半小时，板框式压滤机压滤。

(4)二次中和滤液加热到80～85℃，边搅拌边加入30%氢氧化钠，直至pH4.8时停止。静置，使结晶沉淀，虹吸上清液（可回收胱和酪氨酸），分取底部沉淀后再离心甩干，得胱氨酸粗品(Ⅱ)。;(二)产品规格与检验方法

胱氨酸的一种标准规格为：

含量98.5%以上；［a］=-220°～-214°；

干燥失重＜0.5%；炽灼残渣＜0.2%；

铁盐＜0.001%；重金属＜20ppm。

胱氨酸的含量测定原理是：溴能定量地将胱氨酸氧化成α-氨基-β-磺基-丙酸，而过量的溴又能定量地将KI氧化成碘。因此，可用碘量法来测定胱氨酸的含量。;味精的生产;粗谷氨酸;第二节蛋白质提取工艺特性;蛋白质类别;二、蛋白质及酶的一般提取方法;2.有机溶剂提取;有些蛋白质和酶既溶于稀酸、稀碱，又能溶于一定比例的有机溶剂。在这样的情况下，采用稀的有机溶剂提取常常是为防止水解酶的破坏，并兼有除杂和提高纯化效果的作用。;(1)浓盐或尿素等溶液提取如NaClO4、尿素、肌盐酸等溶液均有人应用于提取膜蛋白，当以上溶液浓度达到2mol/L时，可提取27％以上的膜蛋白，但使用这样条件易引起蛋白质和酶的变性。

(2)碱溶液提取碱性条件也可以解离与膜上成分结合的蛋白质。在pH8-10范围内，某些膜蛋白随着pH的提高而溶解度大大增加，至pHll时，有40%-50％的膜蛋白被抽出，但碱提取法也容易引起蛋白质和酶的失活，应用上不广。

(3)加人金属鳌合剂蛋白质通过金属离子与膜成分结合时，加人金属鳌合剂如EDTA可使蛋白质释放出来。用此法曾成功地提取了膜上ATP酶的偶联因子I。EDTA与超声波联合处理抽提膜上的磷酰转移酶效果更好。;(4）有机溶剂抽提使用乙醇、吡啶、叔戊醇、正丁醇等溶剂抽提及用冷丙酮做成丙酮粉，是提取膜上与脂质结合的脂蛋白或膜内脂蛋白组分最常用也较有效的方法，其中叔戊醇及正丁醇用于膜内脂蛋白效果尤佳。前已提到正丁醇可在广泛的pH(pH3-10)和温度范围（-2—40℃）内使用。用有机溶剂结合其他方法已成功地提取了多种膜上蛋白质和酶，如NPDH脱氢酶、唬珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶、碱性磷酸酯酶、胆碱酯酶等。;用去垢剂分离膜蛋白时，选择去垢剂首先考虑：①去垢剂的溶解能力；②去垢剂的温和性。强离子型去垢剂（如SDS)一般具有很好的溶解能力，但温和情况不理想，容易引起蛋白质变性。弱离子型或非离子型去垢剂对蛋白质变性影响较小，而溶解能力差。去垢剂的溶解能力与溶液的离子强度大小有关。一般来说，离子强度增加，去垢剂的溶解能力也随之增大。所以使用去垢剂溶解膜蛋白时，须考虑各种条件。根据Klingenberg等的经验，分离线粒体膜DP/ATP载体蛋白，选用TritonX100比用Lubrol,Brij和Aminoxide等去垢剂效果更好，所得ADP/ATP载体蛋白具有较高的天然活性。但主要缺点是ritonX100在280nm处有强的紫外吸收，干扰用紫外法测定蛋白质的含量。;(6)加人脂酶或磷酸酯酶水解蛋白质一脂质复合物从蛇毒中提取的磷酸醋酶A主要作用于磷脂，最适pH为6^-