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热原检查标准操作规程

目的

本标准规定了热原检查法的具体操作步骤及技术要求

适用范围

本标准适用于需要作热原检查的品种

引用标准

《中国药典》2015版四部

《中国药品检验标准操作规范》

职责

实验员：负责按本规程的要求严格执行

动物实验室主管：监督本规程的执行情况

术语

热原检查法：本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。

内容

6.1实验材料和用具

6.1.1电子称分度值50g，（家兔称重用）。

6.1.2智能热原仪

6.1.3恒温水浴

6.1.4家兔固定盒，盒的两侧有通气孔

6.1.5实验用具一次性注射器、无菌玻璃瓶、秒表、脱脂棉。

6.1.6试剂75％乙醇、凡士林或50％甘油、灭菌注射用水、氯化钠注射液

6.2溶液的配制供试品溶液

用75％的乙醇棉球消毒安瓿颈部，割开安瓿，精密量取一定量药液按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或氯化钠注射液，混匀。

6.3供试用家兔

6.3.1供试用家兔应健康合格、体重1.7kg以上,雌兔应无孕。

6.3.2家兔预选

6.3.2.1预测体温前7日，即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。

6.3.2.2未曾用于热原检查的家兔、判定为符合规定但组内升温达0.6℃的家兔、或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7日内预测体温，进行挑选。挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液。

6.3.2.3开启智能热原仪选择与预选兔相对应的探头数。测量体温时，测温探头或肛门计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，测温时间不得少于1.5分钟。

6.3.2.4进入预选兔界面。在该界面中设定好判定条件、环境条件、测量条件及兔号、兔重后点击“开始”键即可进行预选兔试验。

6.3.2.5每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。

6.3.2.6试验结束后点击打印即可打印出结果报告

6.3.2.7登记热原检查兔卡。

6.3.3家兔的重复使用

6.3.3.1用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。

6.3.3.2如供试品判定为不符合规定的，则组内全部家兔不再使用。

6.4试验前的准备

6.4.1测温仪或肛门温度计每6个月校验一次，如遇探头损坏更换探头等异常需随时校验。

6.4.2使用细菌内毒素和无菌项目检验合格的0.9%氯化钠注射液对银杏叶提取物等原辅料进行稀释。

6.4.3实验室的温度

6.4.3.1做热原检查前1-2日供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中。

6.4.3.2实验室的温度应在17～25℃范围内。

6.4.3.3实验室与饲养室的温度相差不得大于3℃。

6.4.3.4试验全过程中，温度变化不得大于3℃。

6.4.3.5应防止动物骚动并避免噪声干扰。

6.5检查法

6.5.1选符合规定的家兔，试验前至少1小时停止给饲料和水，称重后置于家兔固定盒内直至试验完毕。

6.5.2按家免排列顺序，依次插入相应的测温探头（测量家兔体温应使用精密度为±0.1℃的测温装置），测温探头或肛门计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于1.5分钟，完成后启智能热原仪，输入当前温度与时间，选择相应的探头数，进入热原试验。

6.5.3按相应的探头号输入兔号和兔子体重。当前温度显示的是每个探头的实时温度，历史温度显示的是相对于当前时间30分钟前的温度，温差显示的是当前温度与历史温度之间的温度差。当家兔测温30分钟后表格各行的颜色会有变化，每一行的颜色代表探头的一种状态

6.5.4每隔30分钟测量家兔体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。一般从开始测体温开始，要经过90分钟左右，待家兔从饲养室抓到实验室体温完全稳定后，再开始分组注射。

6.5.5当日使用的家兔，正常体温在38.0～39.6℃范围内，且同组各兔间正常体温之差不得超过1.0℃。

6.5.6每个供试样品用家兔3只，在测定正常体温后15分钟内给药。

6.5.6.1测定正常体温后即可点击该行探头进行分组。分组确定后点击开始新试验键。

6.5.6.2当按下开始新实验键后会弹出检测资料界面，在该界面中可先把注射剂量，检品名称及批号填好，其它内容可以等到试验进行中再填，输入后点击确认键返回选兔界面继续分组。

6.5.7供试品的剂量应按各该药项下的规定，未规定剂量的药品，可根据