07酶促反应动力学.pptVIP

酶促反应的中间络合物学说底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结酶（E）的结合基团结合底物（S）形成酶-底物复合物（E-S）E+SE-S酶的催化基团催化底物(S)形成产物(P)，E-S转变为E-PE-SE-P酶的结合基团释放产物P，E-P形成E和PE-PE+P米曼氏方程底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结Michaelis-Menten方程V0初速度Vmax最大速度[S]底物浓度Km米氏常数米曼氏方程底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结初速度底物浓度最大速度底物浓度很小时，反应速率取决于底物浓度（一级反应）底物浓度增大后，反应速率取决于S和E-S浓度（混合级反应）底物浓度很大时，E全部被饱和，反应速率取决于E浓度，与底物浓度无关，（零级反应）米曼氏方程底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结当[S]Km,分母[S]可以忽略不计当[S]Km,Km可以忽略不计V0=Vmax[S]Km+[S]令V0=Vmax/2，则Km=[S]即Km是初速度为最大反应速度一半时的底物浓度米曼氏方程底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结Km的意义Km是酶的一个特征性常数Km只与酶的性质有关，与酶浓度无关。Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。Km可近似地表示酶与底物的亲和力Km越小，表示酶与底物的亲和力越大Km越大，表示酶与底物的亲和力越小如果一个酶有多个底物，则Km最小的底物是该酶的最适底物若已知Km，就可计算出在某一底物浓度时，V0相当于Vmax的百分率，如[S]=3Km，则v=0.75Vmax在可逆反应中，两个Km值中最小的反应方向是该酶促反应的主要方向如果代谢途径各酶的Km值已知，Km值最大的酶是限速酶米曼氏方程底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结Km的测定通过实验测定Km和Vmax的方法1.测定不同底物浓度[S]的反应速率V03.通过截距计算Vmax和Km2.以1Vo[S]1对作图例如，包含由一个分子将功能基团转移至另一个分子的反应己糖激酶ATP+葡萄糖 ADP+葡萄糖-6-磷酸一般形式：A+B P+Q如果有2个底物和2个产物，称为“BiBi”BiBi反应能用米氏方程近似地研究：-可以测定每一种底物（A或B）的Km，通过饱和[B]而改变[A]测定A的KAm，和饱和[A]而改变[B]测定B的KBm-BiBi反应的2种类型:i)序列反应：在任何产物释放之前，两种底物必须先结合到酶上 有序反应:按照一定顺序前后结合两种底物和按前后顺序释放两种产物 随机反应:两种底物与酶的结合及两种产物与酶的分离没有固定顺序ii)乒乓反应:在所有底物完全结合之前即有产物释放基团转移反应：第一个底物与酶结合，功能基团转移至酶分子并释放第一个产物，然后第二个底物与酶结合，结合在酶分子上的功能基团转移至第二个底物，最后释放第二个产物Bisubstratereactions双底物反应底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结抑制剂与酶活性底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结不可逆抑制抑制剂与酶以共价键结合不能用透析、超滤方法除去抑制剂酶的修饰抑制可逆抑制抑制剂与酶以非共价键结合能用透析、超滤方法除去抑制剂，而使酶的活性恢复三种类型竞争性抑制抑制剂与底物相似，可以竞争性地与酶的活性中心结合增加底物的浓度可以解除抑制非竞争性抑制抑制剂与底物不相似，抑制剂是与活性中心外结合位点结合可形成酶-抑制剂-底物三元复合物反竞争性抑制酶与底物先结合，然后再与抑制剂结合抑制剂与酶活性底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结三种可逆抑制的区别类型VmaxKm竞争性抑制不变增加反竞争性抑制减小减小非竞争性抑制减小不变温度与酶活性底物浓度化学动力学温度影响酸碱度影响激活作用抑制作用小结最适温度1.在最适温度以下,温度升高,活化分子数增多