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微生物检验的基本操作技术汇总

一、无菌操作技术

1、定义

是指在执行实验过程中，防止一微生物侵入机体和保持无

菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；

无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验

准确和顺利完成的重要环节。

2、内容

无菌操作技术主要包括两方面：

1）创造无菌的培养环境°包括提供密闭的培养容器、培养

容器的灭菌、培养基的灭菌等；

2）在操作和培养过程中防止一其它微生物的侵入的措

施。包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工

具、器皿灭菌、操作方法等。

3、无菌操作原则

1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌

区，接种时必须穿工作服、戴工作帽应在进无菌室前用肥皂洗

手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；

2）在操作前20〜30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行

接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未

使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用

95%酒精点燃烧灼3次后使用。严禁用手直接拿无菌物品，如瓶

塞等，而必须用消毒的钳、镶子等；

3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使

用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；

4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或

样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；

5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属

丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；

6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得

直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶

塞时需反复用酒精灯烧。

二、无菌操作的环境要求

1、无菌室

（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；

2（）无菌室的消毒和防污染

•每日（使用前）紫外线照射0（.5」小时）；

•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；

•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸蒸（2小时），特殊情

况下可增加蒸频次。

3（）无菌室使用要求

①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，

拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；

②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬

吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不

少于30min,使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以

免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰

尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；

③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出

入，如需要传递物品，可通过小窗传递。在无菌室内如需要安装

空调时，则应有过滤装置。

2、超净工作台

超净台的使用与保养：

(1)风速稳定，且符合要求；

(2)使用前开启紫外灯照射30分钟以上；

(3)让超净台预工作10-15分钟；

(4)使用完些后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干

净。

3、无菌器材

(1)灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等；

(2)消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作

台、手等。

(3)无菌间一般只允许放置无菌操作台、转椅等物品；无

菌操作台上一般只允许摆放以下物品：酒精灯、打火机、接种

针、消毒棉球、洗耳球、银子、油性笔、灭菌平皿、试管架、灭

菌吸管、电子天平、250ml灭菌三角瓶、培养基、均质器等。

三、无菌操作的基本技术

1、无菌接种操作

培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管

等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于

培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。

在实验室