十字花科蔬菜中萝卜硫素的测定 高效液相色谱法.docxVIP

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湖南省农业技术规程

HNNY477-2025

十字花科蔬菜中萝卜硫素的测定高效液相色谱法

ThetestmethodforsulforaphaneincruciferousvegetablesHigh-performanceliquidchromatography

2025-12-26发布2025-12-26实施

湖南省农业农村厅发布

目次

前言 1

1范围 2

2规范性引用文件 2

3术语和定义 2

4试剂 2

5仪器与设备 3

6试样准备 3

7萝卜硫素提取 3

8色谱测定 4

9档案管理 5

附录A标准样品高效液相色谱图 6

1

前言

本文件按《湖南省农业技术规程制定与发布管理规范》相关规定起草。

本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由湖南省农业标准化技术委员会提出并技术归口。

本文件起草单位：湖南农业大学，湖南省作物研究所，湖南省蔬菜研究所，邵阳职业技术学

院，永州市农业科学研究所，湖南省常德市鼎城区镇德桥镇人民政府，湘西

土家族苗族自治州农业科学研究院，湖南芝因生物科技有限公司。

本文件起草人：吴秋云，黄惠萍，黄科，毛舒香，费丹丹，吴琪，刘娟，陈璇，郭指君，徐

达，闫航，王军伟，胡震竺。

2

十字花科蔬菜中萝卜硫素的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了十字花科蔬菜中萝卜硫素含量测定的试剂、仪器与设备、试样准备、萝卜硫素提取、色谱测定和档案管理。

本文件适用于十字花科蔬菜萝卜硫素含量的测定与分析。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682实验室用水标准

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4试剂

所有检测试剂如下：

1)去离子水：符合GB/T6682标准一级的规定；

2)萝卜硫素标准品（苄基芥子油苷，Glucotropaeolinpotassiumsalt，GC≥98%，PhytoLab，CAS：5115-71-9）；

3)分析纯二氯甲烷；

4)无水硫酸钠；

5)色谱级乙腈(≥99.9%(GC),gradientgrade,suitableforHPLC,Reag.PhEur,LiChrosolv?);

6)流动相A：去离子水，超声波脱气30s；流动相B：色谱级乙腈，超声波脱气30s。

5仪器与设备

3

实验室常用仪器设备：

1)研钵或微型研磨机；

2)分析天平（精密度万分之一）；

3)旋转蒸发仪；

4)恒温水浴锅；

5)恒温摇床；

6)色谱柱C18柱，250mm×4.6mm，5μm；

7)高效液相色谱仪：DAD紫外检测器等。

6试样准备

十字花科蔬菜不同组织部位（若需分部位检测，需单独取样，如：叶片、根部、花球、种子等）的鲜样或者保存于-80℃超低温冰箱的液氮速冻样品，速冻样品保存时间不超过6个月。

7萝卜硫素提取

7.1称样

将样品经液氮速冻后研磨成粉状，称取2g粉状待测试样至50mL玻璃锥形瓶中。

7.2提取

提取步骤如下：

1)锥形瓶中加入4mL去离子水，将锥形瓶用封口膜封口，置于沸水浴中3min～5min；

2)锥形瓶放入25℃恒温水浴锅中，静置水解4h；

3)锥形瓶中加入15mL二氯甲烷，28℃恒温摇床200rpm震荡10min；

4)玻璃漏斗中放入滤纸，加5g无水硫酸钠干燥，将混合溶剂进行过滤；

5)锥形瓶中加入15mL二氯甲烷，摇匀后再次过滤，重复1次～2次；

6)滤液于38℃旋转蒸发仪上真空浓缩；

7)浓缩后的产物用2mL乙腈洗脱，洗脱液用0.22μm有机滤膜过滤至进样瓶中，待上机检测。

7.3标准品制备

采用外标法对十字花科蔬菜萝卜硫素含量进行检测。将20mg萝卜硫素标准样品（GC≥98%）溶于1mL乙腈，配成20mg/mL萝卜硫