《药品微生物检验技术》课件——模块二 药品安全性检查.pptxVIP

《药品微生物检验技术》模块二药品安全性检查项目一无菌检查

任务一氯化钠注射液无菌检查-直接接种法任务二喜炎平注射液无菌检查-薄膜过滤法目录

项目二无菌检查任务一氯化钠注射液无菌检查-直接接种法

任务引入请思考氯化钠注射液的主要作用是补充电解质，调节体内的水、电解质平衡。很多药物需要溶解在氯化钠注射液中，才能进行肌内注射或者静脉注射，并直接进入血液循环。对氯化钠注射液有什么要求呢？现有一批氯化钠注射液，需按照抽样标准抽取一定数量并对这一批抽检品是否无菌进行判断。

任务分析本任务以氯化钠注射液作为研究对象，介绍氯化钠注射液无菌检查方法及操作，工作内容及要求见下表。

无菌检查法的检查对象是《中国药典》２０２０年版要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、辅料及其他品种。相关知识-无菌检查法检查对象单向流空气区域、工作台面及受控环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。检查环境无菌检查可以确保药品的质量，间接反映药品生产企业的生产条件、工艺方法和管理水平，反映药物不同产地、不同批次之间的质量差异。检查意义

本次任务所用的方法是直接接种法，即通过无菌操作技术将供试品直接接种至相应培养基上，给予供试品中细菌、真菌充分的营养物质与适宜的生长环境，使微生物从单个状态培养成肉眼可见的菌群。相关知识-直接接种法直接接种法

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；相关知识-检查用培养基胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

任务实施一、制订工作计划序号工作内容完成时间成员负责人1培养基制备???2培养基无菌检查???3培养基灵敏度检查???4方法适用性试验5供试品接种6对照试验7培养及观察8结果判断根据任务要求，制定合理工作进度计划，并根据小组成员的特点进行分工。

任务实施二、试验前准备设备、器材、试剂规格数量用途无菌室??操作场所超净工作台??操作区域酒精灯??局部无菌环境75%乙醇??擦拭消毒氯化钠注射液??供试品培养基??提供营养物质移液器??定量移取供试品试管、试管架??容器、支架培养箱???微生物培养菌种???灵敏度检查、阳性对照

任务实施三、试验操作培养基的制备依据培养基培养及制备要求，按照计算用量-称量-溶解-调pH值-分装-灭菌完成。注意特殊物质的溶解方式及顺序，注意分装是培养基装量的高度。计算用量称量溶解调pH值分装灭菌

任务实施三、试验操作培养基的无菌检查制备好的培养基每批随机取不少于５支（瓶），放至相应培养箱中培养１４天，观察培养基状态。如果培养基混浊，则表明培养基有菌，不能用；如果培养基澄清，则表明培养基无菌，符合培养基无菌检查标准。

任务实施三、试验操作培养基的灵敏度检查菌悬液制备培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过５代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第０代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存和确认，以保证试验菌株的生物学特性。

任务实施三、试验操作培养基的灵敏度检查菌种培养基培养时间制备方式金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌接种其新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上３０～３５℃培养１８～２４小时上述培养物用ｐＨ7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液生孢梭菌接种其新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中白色念珠菌接种其新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上２０～２５℃培养２～３天黑曲霉接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基上２０～２５℃培养５～７天或直到获得丰富的孢子加入适量含0.05％（ｍＬ／ｍＬ）聚山梨酯80的ｐＨ7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液将孢子洗脱。

任务实施三、试验操作培养基灵敏度检查操作培养基名称接种菌种试管数空白对照培养时间结果判断硫乙醇酸盐流体培养基（３０～３５℃培养）不大于１００ｃｆｕ的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌每种菌种各２支１支不接种菌种的硫乙醇酸盐流体培养基接种细菌的培养基管培养时间不超过３天，接种真菌的培养基管培养时间不得超过５天空白对照管应无菌生长。若加菌的培养基管均生长良好，判该培