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直接抗人球蛋白试验质量控制流程

一、引言

直接抗人球蛋白试验，通常称为DAT试验，是临床免疫学检验中的一项关键技术，主要用于检测红细胞表面是否存在不完全抗体或补体成分。其结果对于自身免疫性溶血性贫血、药物诱发的溶血、新生儿溶血病以及溶血性输血反应等疾病的诊断、鉴别诊断及治疗监测具有不可替代的价值。为确保DAT试验结果的准确性、可靠性和重复性，建立并严格执行一套完善的质量控制流程至关重要。本流程旨在规范操作，最大限度减少实验误差，为临床提供有价值的实验室依据。

二、分析前质量控制

分析前阶段是保证检验结果质量的首要环节，其质控要点贯穿于标本采集至实验开始前的每一个步骤。

（一）标本采集与处理

1.标本类型与要求：通常采用EDTA抗凝全血标本。采集时应使用真空采血管，确保抗凝剂与血液比例适当，避免血液凝固或稀释过度。

2.采集规范：严格遵循无菌操作技术，避免溶血。溶血标本会干扰试验结果判读，应重新采集。采血后轻轻颠倒混匀，防止血小板聚集及凝血。

3.标识清晰：标本管必须有清晰、唯一的标识，至少包含患者姓名、住院号（或门诊号）及采集日期，确保与申请单信息完全一致。

4.及时送检与处理：标本采集后应尽快送检，若不能立即检测，需在适宜温度下短暂保存，但保存时间不宜过长，具体参照实验室SOP。冷藏标本在检测前应恢复至室温。

5.患者信息核对：接收标本时，务必仔细核对申请单与标本标识信息，确认无误后方可接收。

（二）操作人员与环境

1.人员资质与培训：操作人员必须经过严格培训，熟悉DAT试验原理、操作流程、仪器使用及结果判读标准，考核合格后方可上岗。定期参加相关专业知识更新培训。

2.实验环境：实验室应保持清洁、整齐、通风良好。实验台面定期消毒，避免交叉污染。温湿度应控制在仪器和试剂要求的范围内，并予以记录。

三、分析中质量控制

分析中质量控制是确保试验结果准确性的核心环节，涉及试剂、仪器、操作过程及质控品的使用。

（一）试剂质量控制

1.试剂选择与验收：使用经国家药品监督管理部门批准、性能稳定、质量可靠的商品化抗人球蛋白试剂（包括多特异性和单特异性试剂）。新批号试剂到货后，应进行性能验证，包括与已知阳性和阴性标本的反应性、效价等，符合要求后方可启用。

2.试剂储存与管理：严格按照试剂说明书要求的条件储存，如2-8℃避光保存。注意试剂的有效期，过期试剂严禁使用。试剂启用后应注明启用日期，遵循“先进先出”原则。每次使用前检查试剂是否有浑浊、沉淀、变色等异常情况。

（二）仪器设备质量控制

1.离心机：用于红细胞洗涤和致敏红细胞与抗血清反应后的离心。应定期对离心机的转速、温度（如冷藏离心机）和离心时间进行校准和验证，确保离心条件符合试验要求。每日使用前检查离心机状态，运行平稳，盖锁完好。

2.孵育箱：若试验需要特定温度孵育，孵育箱的温度必须精确控制并每日监测记录，定期校准。

3.加样器：定期对微量加样器进行校准，确保加样体积的准确性。使用一次性吸头，避免交叉污染。

（三）标准操作程序（SOP）的执行

1.SOP的制定与更新：实验室必须建立DAT试验的标准操作程序，内容应包括原理、试剂、仪器、标本要求、操作步骤、结果判读标准、质控要求、注意事项、参考范围及结果报告等。SOP应定期评审和更新，确保其适用性和先进性。

2.严格遵守SOP：操作人员必须严格按照SOP进行操作，不得擅自更改实验步骤或参数。

（四）实验操作过程控制

1.标本准备：按照SOP要求处理待检标本，如离心分离红细胞，用生理盐水洗涤红细胞数次，直至上清液清亮，以去除血浆中可能存在的游离抗体和补体，避免假阳性。洗涤过程应充分，但避免过度洗涤导致红细胞破损。

2.加样操作：准确加入洗涤后的压积红细胞和抗人球蛋白试剂，确保比例恰当。加样过程中避免气泡产生。

3.孵育与离心：严格控制孵育温度和时间（如需要），以及离心的速度和时间。这些参数对试验结果影响显著，必须精确控制。

4.结果判读：离心后，按照SOP规定的方法（如轻轻倾倒或用吸管吸去上清液，观察红细胞扣的凝集情况，或使用专用的判读装置）进行结果判读。判读时应在良好的光线下，背景清晰。同时进行阴阳性对照的判读，只有当对照结果符合预期时，待检标本的结果才有效。

*阴性对照：通常为已知DAT阴性的O型红细胞，与抗人球蛋白试剂反应应为阴性。

*阳性对照：通常为用已知抗体致敏的红细胞，与抗人球蛋白试剂反应应为阳性。市售抗人球蛋白试剂通常配备相应的质控品，或实验室自行制备。

（五）室内质控品的设置与应用

每批次实验或每日实验开始时，必须同时检测阴性质控品和阳性质控品。质控品结果应在可接受范围内，否则需查找原因，排除故障后方可进行临床标本检测。详细记录质控结果，定期回顾