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高效液相色谱法PPT课件

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目录

01.

高效液相色谱法概述

03.

高效液相色谱法设备

02.

高效液相色谱法原理

04.

高效液相色谱法技术

05.

高效液相色谱法应用实例

06.

高效液相色谱法实验技巧

01

高效液相色谱法概述

定义与原理

高效液相色谱法（HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量混合物中各组分的分析技术。

高效液相色谱法的定义

流动相的组成和pH值对分离效率和检测灵敏度有重要影响，需根据样品特性精心选择。

流动相的选择

色谱柱是HPLC系统的核心，通过固定相和流动相的相互作用实现样品组分的分离。

色谱柱的作用

检测器用于检测色谱柱流出物中的组分，常见的有紫外-可见光谱检测器和质谱检测器。

检测器的工作原理

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02

03

04

发展历程

色谱法起源于20世纪初，俄国植物学家茨维特首次使用碳酸钙柱分离植物色素。

色谱法的起源

随着技术进步，HPLC技术不断革新，应用领域从最初的医药拓展到食品、环境等多个行业。

技术革新与应用拓展

1960年代末，高效液相色谱法（HPLC）由霍夫曼和凯勒发明，显著提高了分离效率。

高效液相色谱法的诞生

应用领域

高效液相色谱法广泛应用于药物成分的分析，确保药品质量和疗效。

医药行业

HPLC用于检测水和土壤中的污染物，如重金属和有机化合物，保障环境安全。

环境监测

在食品安全检测中，HPLC用于测定食品中的添加剂、农药残留等，确保食品健康。

食品安全

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高效液相色谱法原理

分离原理

高效液相色谱法中，不同组分在固定相和流动相之间分配系数的差异导致分离。

分配系数差异

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固定相与样品组分间的特异性相互作用，如氢键、疏水作用，是实现分离的关键因素。

选择性相互作用

03

通过改变流动相的组成，可以优化分离效果，提高复杂样品中各组分的分离度。

流动相梯度洗脱

检测原理

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高效液相色谱中，混合物通过色谱柱时，不同组分会因与固定相的相互作用差异而分离。

02

检测器通过测量样品组分的物理或化学性质变化来识别和量化分离后的物质。

03

流动相携带样品通过色谱柱，其组成和流速对分离效率和检测灵敏度有重要影响。

色谱柱分离机制

检测器的工作原理

流动相的作用

流动相与固定相

流动相携带样品通过色谱柱，影响分离效率和分析速度，是色谱分离的关键因素之一。

01

流动相的作用

固定相的材料和性质决定了样品的保留时间和分离效果，常见的固定相有硅胶和聚合物等。

02

固定相的选择

流动相和固定相之间的相互作用决定了样品组分的分离，包括亲水性、疏水性等相互作用。

03

流动相与固定相的相互作用

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高效液相色谱法设备

主要部件介绍

自动进样器可以精确控制样品的注入量和时间，提高分析效率和重复性。

高压输液泵是HPLC的核心部件，负责将流动相以高压形式输送到色谱柱。

检测器用于检测色谱柱流出物的成分，常见的有紫外-可见光谱检测器和质谱检测器。

高压输液泵

自动进样器

色谱柱是分离混合物的关键部件，内填充固定相材料，根据物质的亲疏水性进行分离。

检测器

色谱柱

设备操作流程

在高效液相色谱法中，样品准备包括样品的采集、储存、处理和注入等步骤。

样品准备

启动色谱仪后，需等待系统达到稳定状态，确保流动相和固定相达到平衡。

系统平衡

使用自动或手动注射器将准备好的样品准确注入色谱仪的进样系统。

样品注入

色谱仪运行时，系统会实时采集数据，并通过软件进行分析，以获得色谱图。

数据采集与分析

实验结束后，需对色谱系统进行彻底清洗，并进行必要的维护，以保证设备的稳定性和准确性。

设备清洗与维护

维护与故障排除

为保证分析结果的准确性，建议每使用一定次数后更换色谱柱，避免污染和性能下降。

定期更换色谱柱

01

定期校准检测器，如紫外检测器的波长校准，确保检测结果的精确性。

检测器的校准

02

检查并更换色谱泵的密封圈，定期清洗泵头，防止漏液和堵塞，保证流动相的稳定输送。

泵的维护

03

当出现数据处理错误时，检查色谱工作站软件设置，确保参数设置正确，避免数据采集和分析的偏差。

软件故障排查

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04

高效液相色谱法技术

分离技术

01

色谱柱的选择与应用

选择合适的色谱柱是实现有效分离的关键，不同材料和尺寸的柱子适用于不同类型的分析。

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流动相的优化

通过调整流动相的组成和pH值，可以优化分离效果，提高目标化合物的检测灵敏度。

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梯度洗脱技术

梯度洗脱通过改变流动相的组成，可以有效分离复杂样品中的多种组分，提高分析效率。

检测技术

利用紫外-可见光谱检测器，可以测定样品中特定物质的吸收光谱，用于定性和定量分析。

紫外-可见光谱检测

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荧光检测器对具有荧光特性的化合物具有高灵敏度，适用于痕量分析和复杂基质中的检测。

荧光检测

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质谱检测器通过测