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林木基因过表达载体优化试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.构建过表达载体常用的酶是（）

A.淀粉酶B.限制酶C.蛋白酶D.脂肪酶

2.基因过表达载体的核心元件是（）

A.启动子B.终止子C.标记基因D.目的基因

3.以下哪种是常用的植物转化方法用于过表达载体导入（）

A.化学转化B.电击转化C.农杆菌介导转化D.超声转化

4.过表达载体构建中，连接目的基因和载体的酶是（）

A.DNA聚合酶B.DNA连接酶C.逆转录酶D.解旋酶

5.选择标记基因的作用是（）

A.促进基因表达B.筛选含载体的细胞C.调控目的基因转录D.提高转化效率

6.强启动子的作用是（）

A.增强基因转录B.终止基因转录C.调控翻译D.修饰蛋白质

7.构建过表达载体时，目的基因获取的方法不包括（）

A.PCR扩增B.从cDNA文库获取C.化学合成D.蛋白质测序

8.下列可作为过表达载体骨架的是（）

A.噬菌体B.质粒C.病毒外壳D.核糖体

9.优化过表达载体时，对密码子进行优化是为了（）

A.提高基因稳定性B.增强翻译效率C.改变基因序列D.降低突变率

10.过表达载体构建成功后，验证的方法是（）

A.蛋白质电泳B.荧光定量PCRC.测序D.酶活性测定

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.林木基因过表达载体的元件包括（）

A.启动子B.终止子C.多克隆位点D.复制原点

2.优化过表达载体可从哪些方面入手（）

A.启动子选择B.密码子优化C.载体骨架改造D.标记基因更换

3.用于林木基因过表达载体构建的工具酶有（）

A.限制酶B.DNA连接酶C.Taq酶D.碱性磷酸酶

4.下列属于常用植物表达载体的是（）

A.pBI121B.pCAMBIAC.pUC19D.pET系列

5.过表达载体导入林木细胞的方法有（）

A.农杆菌介导B.基因枪C.花粉管通道法D.电穿孔法

6.选择启动子时需要考虑（）

A.组织特异性B.诱导性C.表达强度D.来源

7.构建过表达载体时，目的基因的来源有（）

A.基因组DNAB.cDNAC.人工合成D.mRNA

8.标记基因的类型有（）

A.抗生素抗性基因B.除草剂抗性基因C.荧光蛋白基因D.酶基因

9.对过表达载体进行验证的技术有（）

A.酶切鉴定B.PCR鉴定C.测序D.表达产物检测

10.优化过表达载体的目的包括（）

A.提高目的基因表达量B.增强载体稳定性C.扩大宿主范围D.降低成本

三、判断题（每题2分，共10题）

1.所有启动子都能使基因高效表达。（）

2.过表达载体构建不需要考虑载体的大小。（）

3.密码子优化对基因表达没有影响。（）

4.农杆菌介导转化只能用于双子叶植物。（）

5.标记基因在转化成功后就没有作用了。（）

6.强启动子一定能带来高的蛋白质表达量。（）

7.构建过表达载体必须先提取基因组DNA。（）

8.载体骨架的选择不影响基因表达。（）

9.转化后的细胞都能成功表达目的基因。（）

10.对过表达载体进行酶切鉴定可以确定目的基因是否正确插入。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述构建林木基因过表达载体的基本步骤。

答：提取目的基因，选择合适载体，用限制酶分别切割目的基因和载体，再用DNA连接酶连接，将重组载体导入受体细胞，筛选鉴定含正确载体的细胞。

2.为什么要对过表达载体的密码子进行优化？

答：不同生物对密码子的偏好性不同，优化密码子可使目的基因在宿主细胞中更高效翻译，提高蛋白质合成效率，增强基因表达水平。

3.简述选择启动子在过表达载体构建中的重要性。

答：启动子决定基因转录起始和强度，选择合适启动子可实现目的基因在特定组织、特定时期及按需求强度表达，影响基因功能研究和应用效果。

4.过表达载体构建后，常用的验证方法有哪些？

答：酶切鉴定，看是否切出预期片段；PCR鉴定，扩增目的基因片段；测序，确定目的基因序列及插入方向是否正确；表达产物检测，分析是否有目的蛋白表达。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.讨论不同转化