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林木单细胞RNA测序样品制备试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.制备林木单细胞RNA测序样品时，常用的细胞分离方法是（）

A.研磨法B.酶解法C.过滤法D.离心法

2.以下哪种试剂可用于保护RNA完整性（）

A.乙醇B.氯仿C.胍盐D.甲醛

3.单细胞悬液制备过程中，细胞计数常用的仪器是（）

A.流式细胞仪B.酶标仪C.显微镜D.离心机

4.制备样品时，适宜的细胞浓度一般为（）

A.102个/mlB.103个/mlC.10?个/mlD.10?个/ml

5.去除细胞碎片常用的方法是（）

A.低速离心B.高速离心C.过滤D.层析

6.采集林木样本后，若不能及时处理，应（）保存

A.常温B.4℃C.-20℃D.-80℃

7.下列哪种酶可用于消化细胞壁（）

A.蛋白酶B.纤维素酶C.淀粉酶D.脂肪酶

8.单细胞RNA测序对RNA的完整性数值（RIN）要求一般不低于（）

A.5B.6C.7D.8

9.制备样品时，常用的缓冲液是（）

A.PBSB.Tris-HClC.HEPESD.以上都常用

10.用于单细胞RNA测序的细胞活力应不低于（）

A.60%B.70%C.80%D.90%

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.影响林木单细胞RNA测序样品质量的因素有（）

A.样本采集部位B.样本保存时间C.细胞分离方法D.试剂质量

2.制备单细胞悬液的方法有（）

A.机械法B.酶解法C.化学法D.组织块培养法

3.以下属于保护RNA措施的有（）

A.低温操作B.使用RNase抑制剂C.快速处理样本D.用DEPC处理水

4.细胞计数方法包括（）

A.台盼蓝染色法B.血球计数板法C.流式细胞仪计数法D.荧光定量法

5.选择酶解试剂时需考虑（）

A.酶的活性B.酶的特异性C.酶的浓度D.酶解时间

6.样品制备过程中可能引入的污染有（）

A.核酸污染B.蛋白污染C.微生物污染D.化学试剂残留

7.评估RNA质量的指标有（）

A.浓度B.纯度C.RIN值D.A260/A280比值

8.常用的细胞冻存保护剂有（）

A.DMSOB.甘油C.乙醇D.葡萄糖

9.单细胞RNA测序样品制备的基本要求包括（）

A.细胞活性高B.RNA完整性好C.细胞数量足够D.无杂质污染

10.制备样品过程中，需要的实验器材有（）

A.移液器B.离心机C.天平D.超净工作台

三、判断题（每题2分，共10题）

1.采集林木样本时，任何部位都可用于单细胞RNA测序样品制备。（）

2.蛋白酶可用于消化林木细胞的细胞壁。（）

3.细胞活力低于70%对单细胞RNA测序结果无影响。（）

4.用DEPC处理过的水可直接用于所有试剂配制。（）

5.离心转速越高，细胞碎片去除越彻底，对细胞损伤也越小。（）

6.只要RNA浓度足够，RIN值低也能进行单细胞RNA测序。（）

7.制备单细胞悬液时，机械法比酶解法更温和。（）

8.样品制备过程中，环境温度对RNA完整性影响不大。（）

9.用流式细胞仪计数细胞时，只能区分活细胞和死细胞。（）

10.保存林木样本时，-20℃比-80℃更有利于长期保存。（）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述林木单细胞RNA测序样品制备的主要步骤。

答：采集合适部位林木样本，用机械或酶解法分离细胞制成单细胞悬液，去除细胞碎片后进行细胞计数与活力检测，确保细胞数量与活力达标，提取并检测RNA质量，若合格则用于后续测序。

2.为什么RNA完整性对单细胞RNA测序很重要？

答：RNA完整性影响基因表达量的准确测定。不完整的RNA会使部分基因转录本丢失或测序数据偏差大，无法真实反映细胞内基因表达情况，进而影响对细胞功能和分化等研究的准确性。

3.细胞活力对单细胞RNA测序结果有何影响？

答：细胞活力低时，细胞代谢等生理活动受抑制，基因表达模式改变，测序数据不能代表正常细胞状态，且死细胞释放核酸会干扰活细胞测序数据，降低数据可靠性与分析