苹果轮纹病抗性相关miRNA的筛选与功能解析：揭示苹果抗病分子机制.docxVIP

苹果轮纹病抗性相关miRNA的筛选与功能解析：揭示苹果抗病分子机制

一、引言

1.1研究背景

苹果作为世界上广泛种植且深受消费者喜爱的水果之一，在全球水果产业中占据重要地位。然而，苹果生产面临着多种病害的威胁，其中苹果轮纹病是影响苹果产量与品质的关键病害之一。苹果轮纹病具有较强的致病性和传播性，一旦爆发，常常导致大量果实腐烂、枝干受损，给果农带来巨大的经济损失。在当前苹果种植面积不断扩大，集约化、规模化种植趋势日益明显的背景下，苹果轮纹病的防控难度也在逐渐增加。传统的化学防治方法虽然在一定程度上能够控制病害，但长期大量使用化学农药不仅导致病原菌抗药性增强，还对生态环境造成了严重破坏，威胁食品安全。因此，探索苹果轮纹病的绿色、可持续防控策略迫在眉睫。

微小核糖核酸（miRNA）作为一类内源性非编码小分子RNA，在植物生长发育、逆境响应等多个生物学过程中发挥着关键的调控作用。近年来，随着对植物与病原菌互作机制研究的深入，miRNA在植物抗病中的重要作用逐渐被揭示。研究发现，植物在受到病原菌侵染时，会通过调控自身miRNA的表达来激活或抑制相关抗病基因的表达，从而增强或减弱植物的抗病能力。miRNA参与调控植物的基础免疫反应、系统获得性抗性以及对病原菌的特异性识别等多个环节，为植物抗病机制的研究提供了新的视角。深入研究miRNA在苹果抗轮纹病中的作用机制，筛选出与苹果轮纹病抗性相关的miRNA，不仅有助于从分子层面揭示苹果的抗病机理，还能为苹果抗病品种的选育提供新的分子标记和基因资源，为苹果轮纹病的绿色防控提供理论依据和技术支持。

1.2苹果轮纹病概述

苹果轮纹病，又称“粗皮病”“轮纹烂果病”，是由葡萄座腔菌（Botryosphaeriadothidea）侵染所引起的一种重要的真菌性病害，在世界各苹果产区均有发生，尤其在中国、韩国、日本等亚洲国家危害较为严重。

病原菌主要以菌丝体、分生孢子器及子囊壳在被害枝干上越冬，作为次年病害发生的主要初侵染源。春季气温回升，遇降雨后，病原菌产生大量分生孢子，借助风雨飞溅传播，近距离侵染苹果的枝干和果实。病菌侵染果实后，通常具有潜伏侵染特性，在果实生长前期，病菌处于潜伏状态，不表现明显症状。随着果实成熟，特别是在近成熟期和贮藏期，当果实的生理状态发生变化，抗性下降时，潜伏的病菌开始活动，迅速扩展蔓延，导致果实发病。

苹果轮纹病主要危害枝干和果实。枝干发病初期，以皮孔为中心形成扁圆形或椭圆形红褐色病斑，质地坚硬，中心突起，病斑边缘龟裂，随着病情发展，病组织翘起如马鞍状，多个病斑相互连接，使枝干表面变得十分粗糙，故有“粗皮病”之称。果实发病时，初期以皮孔为中心产生水渍状褐色小斑点，后逐渐扩大呈圆形或近圆形，病斑具有明显的同心轮纹，中部呈褐色至灰白色，边缘呈红褐色，病斑组织软腐，严重时果实腐烂，失去商品价值，在贮藏期病害还可继续发展，造成大量烂果。

苹果轮纹病对苹果产业的危害巨大。一方面，它严重影响苹果的产量，发病果园的轮纹烂果病发病率一般在20%-30%，重病果园可达50%以上，导致果实减产，果农收入减少；另一方面，患病果实品质下降，口感变差，失去光泽，不耐贮藏和运输，降低了苹果在市场上的竞争力，制约了苹果产业的健康可持续发展。此外，为了防治苹果轮纹病，果农往往需要投入大量的人力、物力和财力用于农药的购买和喷施，进一步增加了生产成本，同时也带来了环境污染和食品安全等问题。

1.3miRNA在植物抗病中的作用

miRNA是一类长度约为22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，广泛存在于动植物体内。其前体具有典型的发夹结构，在细胞核内由RNA聚合酶II转录生成初级转录本（pri-miRNA），随后被核酸酶Drosha切割成约70-100个核苷酸的茎环结构前体（pre-miRNA），pre-miRNA被转运到细胞质后，由Dicer酶进一步切割，形成成熟的miRNA。成熟的miRNA与AGO蛋白等组成RNA诱导沉默复合体（RISC），通过与靶基因mRNA的互补配对，在转录后水平对靶基因的表达进行调控，主要作用方式包括切割靶mRNA和抑制靶mRNA的翻译过程。

在植物与病原菌互作过程中，miRNA扮演着重要的调控角色。当植物受到病原菌侵染时，植物体内的miRNA表达谱会发生显著变化。一些miRNA的表达上调，通过负调控其靶基因的表达，参与植物的抗病反应。例如，某些miRNA可以靶向调控植物激素信号转导途径中的关键基因，如生长素、水杨酸、茉莉酸等激素信号途径相关基因，从而影响植物激素介导的抗病反应。水杨酸信号通路在植物对生物营养型病原菌的防御中起关键作用，miRNA通过调控水杨酸信号通路