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樟树遗传转化体系优化及抗寒基因转化的研究与突破

一、引言

1.1研究背景

樟树（Cinnamomumcamphora(L.)Presl），作为樟科樟属的常绿大乔木，是亚热带常绿阔叶林的代表性树种，主要分布于长江以南地区，在台湾、福建、江西、湖南、四川等地栽培广泛。其在多个领域展现出了极高的价值，具有重要的经济、生态和文化意义。

在经济价值方面，樟树全身是宝。其木材坚硬美观，纹理细腻，耐腐防虫，是制作高档家具、雕刻工艺品以及建筑用材的优质原料，在家具制造和工艺品加工行业中备受青睐；枝叶可提取樟脑和樟油，樟脑在医药领域用于制作驱虫剂、镇痛剂等药品，樟油则广泛应用于香料、化妆品、食品添加剂以及工业溶剂等领域，为化工产业提供了重要的原料支持。

从生态价值来看，樟树树冠茂密，四季常青，枝叶广展，具有很强的吸尘、滞尘能力，能够有效吸附空气中的颗粒物，减少灰尘对环境的污染；同时，它还能吸收二氧化硫、氮氧化物等有害气体，对净化空气、改善大气质量发挥着重要作用。此外，樟树为众多生物提供了栖息地和食物来源，有助于维护生态系统的生物多样性和生态平衡。

在文化价值层面，樟树在我国历史文化中占据着独特的地位，常被视为吉祥、长寿和幸福的象征，承载着人们美好的寓意和情感寄托。许多古老的樟树作为历史的见证者，成为当地文化传承和地域特色的重要标志，具有极高的历史文化保护价值。

然而，樟树性喜温暖湿润的气候条件，耐寒性不强，适生于年平均温度16-17℃以上，绝对低温-7℃以上地域。当温度低于5℃时，其生长活动会显著减缓直至停止，在零下10℃左右时，可能会遭受严重的冻害，甚至死亡。低温胁迫会对樟树的生理生化过程产生负面影响，如导致细胞膜透性增加，电解质外渗，破坏细胞内的离子平衡和代谢稳态；影响光合作用和呼吸作用等生理过程，降低植物的能量供应和物质合成能力；还会引发活性氧的积累，对细胞造成氧化损伤。这些不良影响限制了樟树在北方寒冷地区的种植和推广，使其分布范围受到很大制约。

为了突破樟树种植的低温限制，扩大其种植范围，充分发挥其在经济、生态和文化等方面的价值，开展遗传转化及抗寒基因研究显得尤为必要。通过遗传转化技术，将抗寒基因导入樟树基因组中，有望培育出具有更强抗寒能力的樟树新品种，从而为樟树产业的发展开辟更广阔的空间，也能为生态环境建设提供更多的树种选择。

1.2研究目的与意义

本研究旨在优化樟树遗传转化体系，实现抗寒基因对樟树的高效转化，具体目标如下：一是通过对影响樟树遗传转化的关键因素，如外植体类型、农杆菌菌株及浓度、侵染时间、共培养条件等进行系统研究和优化，建立高效、稳定的樟树遗传转化技术体系，提高遗传转化效率；二是筛选和克隆具有高效抗寒功能的基因，利用优化后的遗传转化体系将抗寒基因导入樟树细胞，获得抗寒基因转化的樟树植株，并对其抗寒性能进行鉴定和评价。

本研究对于樟树种植和研究具有重要意义：在种植方面，培育出的抗寒樟树新品种能够适应更广泛的气候条件，尤其是在北方低温地区也能正常生长，这将显著扩大樟树的种植范围，为当地的绿化、生态建设以及相关产业发展提供新的选择；抗寒樟树的推广种植有助于增加森林覆盖率，改善生态环境，提升生态系统的稳定性和服务功能；同时，也能为木材加工、香料提取等相关产业提供更丰富的原材料，促进地方经济的发展。从研究角度来看，本研究深入探讨樟树遗传转化机制以及抗寒基因的功能和作用途径，能够丰富对木本植物遗传转化和抗寒分子机制的认识，为其他木本植物的遗传改良和抗寒研究提供理论参考和技术借鉴；此外，还能推动植物基因工程技术在林业领域的应用和发展，加速林木新品种的培育进程。

1.3国内外研究现状

在樟树遗传转化研究方面，国内外学者已取得了一定的成果。根癌农杆菌介导法是常用的遗传转化方法之一，杜丽等人通过根癌农杆菌介导，以香樟胚性愈伤组织为受体建立遗传转化体系，发现以胚性愈伤组织为受体能取得较好的转化效果，确定了50mg?L?1的潮霉素对胚性愈伤组织有良好的筛选效果，当根癌农杆菌OD600为0.6时转化率较高，侵染时间延长至40min并共培养3d能显著提高转化效率。此外，还有研究尝试利用基因枪介导法等其他方法进行樟树遗传转化，但目前这些方法在樟树遗传转化中的应用相对较少，且转化效率和稳定性有待进一步提高。

在樟树抗寒基因研究领域，已有一些与抗寒相关的基因被克隆和研究。CBF(CRT/DREbindingfactor)基因家族在植物抵御低温胁迫中发挥重要作用，王建格等人克隆得到香樟的4个CcCBFs(CcCBFa,CcCBFb,CcCBFc,CcCBFd)基因，并初步验证了CcCBFc基因（GenBankNo.KP336741）可以提高转基因烟草的抗旱、抗