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组织工程气管种子细胞的实验研究：现状、挑战与突破

一、引言

1.1研究背景与意义

气管作为人体呼吸系统的重要组成部分，承担着气体交换的关键作用。然而，多种因素，如先天性疾病、肿瘤、外伤和医源性损伤等，都可能导致气管不可逆性损伤。临床上，当气管损伤范围较大时，传统的治疗方法如保守治疗、支架置入、端端吻合等往往难以满足治疗需求，气管移植成为挽救患者生命和恢复呼吸功能的重要手段。

目前，临床上常用的气管重建方式包括自体组织重建、同种异体气管移植、人造气管假体移植和组织工程气管移植。自体组织重建虽然不存在免疫排斥问题，但会造成患者其他部位的创伤，且组织结构与气管本身差异较大，难以完全恢复气管的正常功能；同种异体气管移植的组织来源有限，并且需要长期使用免疫抑制剂来抑制免疫反应，这不仅增加了患者的经济负担，还可能引发各种并发症；人造气管假体移植则面临组织相容性差、不能生物降解等问题，易造成自体组织的侵蚀、感染等。

组织工程气管作为一种新兴的治疗手段，为气管疾病的治疗带来了新的希望。它通过将生物相容性良好的支架材料与种子细胞结合，在体外构建出具有生物活性的气管替代物，有望解决传统气管移植方法存在的诸多问题。组织工程气管不仅能降低抗原细胞的表达，抑制免疫反应，还能够预先在体外进行气管的血管化以及相关组织细胞的再生培养。种子细胞作为组织工程气管构建的关键要素之一，其选择和应用直接影响着组织工程气管的性能和治疗效果。因此，深入研究组织工程气管种子细胞，对于解决气管疾病治疗难题、提高患者生活质量具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

在国外，组织工程气管种子细胞的研究起步较早，取得了一系列重要成果。早期研究主要集中在使用软骨细胞作为种子细胞构建组织工程气管。例如，1994年，研究者利用聚羟基乙酸、硅胶和软骨细胞制备的组织工程气管进行裸鼠气管移植，标志着组织工程气管研究的开端。此后，软骨细胞在组织工程气管构建中得到了广泛应用。然而，软骨细胞存在取材困难、体外扩增能力有限等问题，限制了其进一步应用。

随着研究的深入，成体干细胞逐渐成为组织工程气管种子细胞的研究热点。骨髓间质干细胞因其来源丰富、易于获取和具有多向分化潜能等优点，受到了众多研究者的关注。有研究以骨髓间质干细胞为种子细胞，通过特定的诱导分化方法，成功构建出与自体气管相近的组织工程化气管。此外，脂肪源性干细胞、脐带间充质干细胞等也被尝试应用于组织工程气管的构建，并取得了一定的进展。

气管基底细胞（TBCs）作为气管上皮化的理想种子细胞，具有多向分化潜能，能分化为纤毛细胞和杯状细胞，且对支架材料有很强的适应性，可促进上皮化和组织整合。但TBCs在体外增殖能力有限，表型不稳定，获取足够数量的活细胞用于高效快速的上皮化成为难题。上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心的研究人员聚焦于铁死亡这一细胞死亡形式，探索其对TBCs增殖的影响，并评估Ferrostatin-1（FER-1）这一铁死亡抑制剂能否促进TBCs增殖，加速组织工程气管（TET）上皮化，相关成果发表在《StemCellResearch》。研究表明，FER-1能有效抑制TBCs的铁死亡，促进其增殖和活力，加速TET上皮化，减少肉芽组织形成，为改善气管重建效果、降低术后并发症提供了新策略。

在国内，组织工程气管种子细胞的研究也在积极开展，并取得了显著成果。上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心胸外科郑景浩教授团队在组织工程气管快速上皮再生方面取得重要突破。他们利用3T3-J2细胞（鼠源胚胎成纤维细胞）来源的外泌体与具有增殖分化能力的气管上皮基底细胞（BCs）共培养，可以极大促进气管上皮BCs增殖，细胞从P0代扩增到P6代仅需27天，并保持分化能力，而利用传统方法单独培养气管上皮BCs，细胞从P0代扩增到P2代还需30天，且丧失分化能力。该研究有效解决了气管上皮细胞体外增殖分化困难这一棘手问题，突破了组织工程气管再上皮化的研究瓶颈。

国内学者还在探索其他新型种子细胞和优化现有种子细胞的应用方面进行了大量研究。通过基因编辑技术对种子细胞进行修饰，提高其增殖能力和分化稳定性；研究不同种子细胞的组合应用，以实现组织工程气管的多细胞成分构建，提高其功能完整性等。

1.3研究目的与创新点

本研究旨在深入探索新型种子细胞或优化现有种子细胞在组织工程气管构建中的应用，通过一系列实验研究，筛选出具有良好增殖能力、分化潜能和生物相容性的种子细胞，并建立高效的种子细胞培养和诱导分化体系，为组织工程气管的临床应用提供坚实的理论基础和技术支持。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：一是从细胞代谢和信号通路的角度深入研究种子细胞的增殖和分化机制，有望发现新的调控靶点，为优化种