UPLC-MS_MS法分析β淀粉样蛋白中Asp残基的外消旋化.pdfVIP

总第226期山西化工Total226

2024年第9期ShanxiChemicalIndustryNo.9，2024

分析与测试

DOI:10.16525/14-1109/tq.2024.09.017

UPLC-MS/MS法分析β淀粉样蛋白中Asp残基的

外消旋化

1，21，21，21，2，3*

朱昌龙，余珊，李悦冰，李博

，

（1.中国药科大学药物分析系江苏南京210009；

，

2.中国药科大学蛋白质化学与结构生物学重点实验室江苏南京210009；

3.中国药科大学（杭州）创新药物研究院，浙江杭州310018）

摘要：目的：建立β淀粉样蛋白中Asp外消旋化的LC-MS/MS分析方法。方法：采用胰蛋白酶和Glu-C酶两步

酶解β淀粉样蛋白，酶解产物LC-MS/MS分析的色谱条件：分离柱为InfinityLabPoroshell120EC-C18色谱柱

，流动相梯度洗

（2.7μm，3.0×150mmAgilent），流动相A为5%乙腈-0.1%甲酸水B为75%乙腈-水，脱（0~30min，

0~28%B；30~30.01min，28%~100%B；30.01~35min，100%~100%B；35.0~35.01min，100%~0%B；35.01~40min，0%B），

流速为0.3mL/min。质谱条件：采用电喷雾离子源及正离子多反应监测模式（SRM）定量。结果：在L型多肽存在下，

D型多肽的质量浓度在1~250ng/mL内，其峰面积与多肽的质量浓度之间线性良好（r0.999），最低定量限（LLOQ）

为1ng/mL；LLOQ、低（LQC）、中（MQC）、高浓度（HQC）日内和日间精密度RSD值均小于15%，加样回收率为

85.3%~107.3%。建立的方法对D/（D+L）型淀粉样蛋白为2%~50%的混合样本中Asp1，Asp23外消旋化测定结果准

：

确，准确度在95.35%~117%之间。联合胰蛋白酶与Glu-C成功鉴定了淀粉样蛋白中Asp7残基的外消旋化。结论所

建立的方法可用于淀粉样蛋白中Asp残基外消旋化的分析，该方法操作简便，结果准确，灵敏度高。

：；天冬氨酸

关键词β淀粉样蛋白；外消旋化；液质联用

：：：

中图分类号O657文献标识码A文章编号1004-7050（2024）09-0055-06

[17-19]，这种方法

蛋白质和多肽中氨基酸转化为D-型的立体异的反相色谱上实现分离。然而也面临

（

构修饰，称为外消旋化racemization），是蛋白质翻译挑战，异构体多肽之间的分离情况取决于肽