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粗山羊草抗白粉病基因PmAe16185和PmAe2147的定位解析与应用拓展

一、引言

1.1研究背景与意义

1.1.1小麦白粉病的危害与现状

小麦作为全球重要的粮食作物之一，其产量和质量直接关系到世界粮食安全和人类生活。然而，小麦生长过程中面临着多种病害的威胁，其中小麦白粉病是一种极具破坏力的全球性病害，在各主要产麦国都有广泛发生。在我国，小麦白粉病的发病范围覆盖了东北、华北、西北等多个主要麦区。20世纪70年代以来，随着耕作制度的变革、化肥使用量的增加、种植密度的提高以及矮秆品种的大面积推广，小麦白粉病的危害范围逐渐扩大，从原本仅在冷凉潮湿的西南地区和山东沿海地区严重发生，蔓延至江淮、黄淮等其他主要产麦区，给小麦生产带来了严峻挑战。

小麦白粉病是由禾本科布氏白粉菌引起的真菌性病害，病菌可侵染小麦植株地上部的叶片、叶鞘、茎秆和穗部等多个器官，尤其以叶片和叶鞘受害最为严重。发病初期，病部会出现分散的白色丝状霉斑，随着病情的发展，霉斑逐渐扩大并连片，形成一层厚厚的白色粉状霉层，严重影响叶片的光合作用。随着病害的加重，叶片会逐渐褪绿、变黄乃至卷曲枯死，重病株常常表现为矮小细弱，分蘖数减少、成穗率降低，穗小粒少，千粒重显著下降，从而导致小麦产量大幅降低。据相关研究表明，轻度发病时小麦产量损失可达5%-10%，中度发病时损失在20%-30%，而重度发病时减产幅度可能超过50%，这对于小麦生产和粮食安全来说是巨大的威胁。此外，小麦白粉病还会影响小麦的品质，降低其营养成分和口感，进而降低市场价值，对农业经济造成负面影响。

1.1.2抗白粉病基因研究的重要性

防治小麦白粉病对于保障小麦的产量和质量、确保粮食安全具有至关重要的意义。目前，防治小麦白粉病的方法主要包括化学防治、农业防治和生物防治等。然而，化学防治虽然在短期内能够有效控制病害的发展，但长期大量使用化学农药不仅会导致病原菌产生抗药性，还会对环境造成污染，危害生态平衡和人类健康；农业防治措施如合理密植、科学施肥等虽然能够在一定程度上减轻病害的发生，但受环境和种植条件的限制较大，难以从根本上解决问题；生物防治技术目前仍处于发展阶段，其防治效果还不够稳定，在实际生产中的应用范围有限。

相比之下，挖掘和利用小麦自身的抗白粉病基因，培育抗病品种是防治小麦白粉病最为经济、有效且环境友好的策略。通过将抗白粉病基因导入小麦品种中，可以增强小麦对病原菌的抗性，从遗传层面提高小麦的抗病能力，从而减少化学农药的使用，降低生产成本，保护生态环境。此外，抗病品种的推广应用还能够稳定小麦的产量和品质，保障农业的可持续发展，对于维护粮食安全和社会稳定具有重要的战略意义。因此，深入开展小麦抗白粉病基因的研究，对于解决小麦白粉病危害问题、推动小麦产业的健康发展具有不可替代的重要作用。

1.1.3粗山羊草抗白粉病基因的研究价值

粗山羊草（A

二、材料与方法

2.1试验材料

2.1.1植物材料

本研究选用了多份粗山羊草材料，包括来自不同地理区域和生态环境的材料，如Y16185、Y2147等，以确保抗白粉病基因的多样性。这些粗山羊草材料在长期的自然选择和进化过程中，可能积累了独特的抗病基因，为研究提供了丰富的遗传资源。

感病对照材料选用了对小麦白粉病高度敏感的粗山羊草品种AL8/78，其在白粉病菌侵染下表现出典型的感病症状，如叶片上出现大量白色粉状霉层、病斑迅速扩展等，作为对照可准确判断其他材料的抗病性差异。普通小麦材料则选用了中国春（ChineseSpring），它是小麦遗传研究中常用的标准品种，具有基因组信息明确、遗传背景清晰等优点，常被用于基因定位和遗传分析等研究中。

为了将粗山羊草的抗白粉病基因导入普通小麦，本研究还利用四倍体小麦（硬粒小麦，TriticumdurumDesf.）与粗山羊草进行杂交，通过幼胚拯救技术和套袋自交，人工合成了双二倍体（AABBDD）。这些双二倍体材料不仅包含了粗山羊草的D基因组，还整合了四倍体小麦的A、B基因组，为后续将抗白粉病基因转移到普通小麦提供了桥梁材料。

2.1.2试剂与仪器

DNA提取试剂包括CTAB提取缓冲液（含2%CTAB、100mMTris-HClpH8.0、20mMEDTApH8.0、1.4MNaCl、0.2%β-巯基乙醇，使用前加入）、氯仿-异戊醇（24:1，v/v）、异丙醇、70%乙醇等。CTAB提取缓冲液中的CTAB可与核酸形成复合物，在高盐环境下溶解，而蛋白质等杂质则被去除；氯仿-异戊醇用于抽提去除蛋白质等有机杂质；异丙醇用于沉淀DNA；70%乙醇用于洗涤DNA沉淀，去除残留的盐分和杂质。

PCR扩增试剂有TaqDNA聚合酶、dNTPs混