DS16多糖微生物絮凝剂的制备及安全性评价.docxVIP

DS16多糖微生物絮凝剂的制备及安全性评价

一、引言

在污水处理和水质净化领域，絮凝剂发挥着至关重要的作用。传统的化学絮凝剂虽然具有一定的絮凝效果，但可能带来二次污染等问题。微生物絮凝剂作为一种新型的环保型絮凝剂，具有无毒、可生物降解等优点，受到了广泛的关注。DS16多糖微生物絮凝剂是一种具有良好絮凝性能的微生物絮凝剂，对其进行制备及安全性评价具有重要的理论和实际意义。

二、DS16多糖微生物絮凝剂的制备

（一）菌种的筛选与培养

菌种筛选

从不同的环境样本中分离筛选出能够产生高效絮凝剂的微生物菌株。通过平板划线法和稀释涂布平板法对样本进行分离纯化，然后采用高岭土悬液絮凝实验对分离得到的菌株进行初筛，挑选出具有较高絮凝活性的菌株。进一步对初筛得到的菌株进行复筛，通过测定其在不同条件下的絮凝率，确定最佳的产絮凝剂菌株DS16。

菌种培养

将筛选得到的DS16菌株接种到液体培养基中进行培养。培养基的配方为：葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，酵母提取物3g/L，NaCl5g/L，pH值7.0。培养条件为：温度30℃，摇床转速180r/min，培养时间24h。

（二）发酵工艺优化

碳源的选择

分别以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉作为碳源，考察不同碳源对DS16菌株产絮凝剂的影响。结果表明，葡萄糖作为碳源时，菌株的絮凝率最高，为最佳碳源。

氮源的选择

分别以蛋白胨、牛肉膏、硝酸铵、尿素作为氮源，考察不同氮源对DS16菌株产絮凝剂的影响。结果表明，蛋白胨作为氮源时，菌株的絮凝率最高，为最佳氮源。

培养温度的优化

在25℃、30℃、35℃、40℃下分别培养DS16菌株，考察不同培养温度对产絮凝剂的影响。结果表明，30℃时菌株的絮凝率最高，为最佳培养温度。

初始pH值的优化

将培养基的初始pH值分别调节为6.0、7.0、8.0、9.0，考察不同初始pH值对DS16菌株产絮凝剂的影响。结果表明，初始pH值为7.0时，菌株的絮凝率最高，为最佳初始pH值。

（三）絮凝剂的提取与纯化

发酵液的预处理

将发酵液在4℃下以8000r/min的转速离心15min，收集上清液。

絮凝剂的沉淀

向上清液中加入3倍体积的无水乙醇，在4℃下静置过夜，然后以8000r/min的转速离心15min，收集沉淀。

沉淀的洗涤与干燥

用70%的乙醇溶液洗涤沉淀2-3次，然后将沉淀在真空干燥箱中于40℃下干燥至恒重，得到DS16多糖微生物絮凝剂粗品。

絮凝剂的纯化

将粗品用蒸馏水溶解，通过0.45μm的微孔滤膜过滤，然后将滤液进行透析处理，去除小分子杂质。最后将透析后的溶液进行冷冻干燥，得到DS16多糖微生物絮凝剂纯品。

三、DS16多糖微生物絮凝剂的安全性评价

（一）急性毒性试验

试验动物

选用健康的昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。

试验方法

采用最大耐受剂量法（MTD）进行急性毒性试验。将小鼠随机分为对照组和试验组，每组10只。对照组给予等体积的生理盐水，试验组给予DS16多糖微生物絮凝剂的最大耐受剂量（2000mg/kg）。给药后连续观察7天，记录小鼠的中毒症状和死亡情况。

试验结果

试验期间，试验组小鼠未出现任何中毒症状，也无死亡情况发生。表明DS16多糖微生物絮凝剂的急性毒性极低，LD50大于2000mg/kg，属于实际无毒物质。

（二）遗传毒性试验

Ames试验

采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）检测DS16多糖微生物絮凝剂的遗传毒性。试验设0、25、50、100、200、400μg/plate六个剂量组，同时设阳性对照组和阴性对照组。将各剂量组的絮凝剂与鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102菌株及S9混合液在37℃下培养48h，然后计数各菌株的回变菌落数。

试验结果

各剂量组的回变菌落数与阴性对照组相比，无显著差异（P0.05），而阳性对照组的回变菌落数显著增加（P0.01）。表明DS16多糖微生物絮凝剂在Ames试验中未表现出遗传毒性。

（三）慢性毒性试验

试验动物

选用健康的SD大鼠，体重180-220g，雌雄各半。

试验方法

将大鼠随机分为对照组和低、中、高三个剂量组，每组20只。对照组给予等体积的生理盐水，低、中、高剂量组分别给予DS16多糖微生物絮凝剂100、200、400mg/kg?d，连续灌胃90天。试验期间，定期观察大鼠的一般状况、体重变化和饮食情况。试验结束后，对大鼠进行血液学、血液生化和病理学检查。

试验结果

试验期间，各剂量组大鼠的一般状况良好，体重增长和饮食情况与对照组相比无显著差异（P0.05）。血液学和血液生化检查