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探秘鱼类内脏脂肪素基因：克隆、表达与全序列解析

一、引言

1.1研究背景与意义

长久以来，脂肪组织被单纯地认为是一种惰性的终末分化器官，主要在脂质储存和能量稳态方面发挥作用，其中白色脂肪组织（又称皮下脂肪组织）以甘油三酯的形式储存富余能量，棕色脂肪组织（又称内脏脂肪组织或腹部脂肪组织）则主要消耗能量以维持体温，这种作用在小型动物或新生动物体内尤为明显。然而，随着研究的深入，越来越多由脂肪组织产生或分泌的具有生物活性的物质被相继发现，脂肪组织作为重要内分泌器官的观点逐步得到广泛证实和认可。脂肪组织分泌的众多活性物质被称为脂肪细胞因子或脂肪因子，不仅包括脂联素、瘦素等传统激素分子，肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症细胞因子，还包括纤溶酶原激活物抑制剂1、血管紧张素原、抵抗素、apelin等其他蛋白。

内脏脂肪素（visfatin）是近年来备受关注的一种新型脂肪细胞因子。2005年，日本学者Fukuhara等运用mRNA差异显示技术，在人和小鼠脂肪组织中首次发现了内脏脂肪素，因其在内脏脂肪细胞中高度表达而得名，简称为内脂素。深入研究发现，visfatin基因与前B细胞集落增强因子（pre-Bcellcolony-enhancingfactor，PBEF）基因的核苷酸组成一致，PBEF可协同白细胞介素7和干细胞因子促进早期B细胞成熟。此外，visfatin还具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide，NAD）生物合成中关键酶烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamidephosphoribosyltransferase，Nampt）的活性，通过限速催化磷酸核糖基团从5-磷酸核糖-1-焦磷酸盐向烟酰胺转移，形成烟酰胺单核苷酸，再生成NAD，从而调控NAD的生成速率。在众多文献资料中，visfatin、PBEF、Nampt通用，本文统一以visfatin称之。

对visfatin的研究具有重要意义。它不仅具有类胰岛素样降血糖、调节胰岛素信号转导、促进脂肪合成等作用，还在细胞质中具有尼克酰胺磷酸核糖转移酶特性，与缺氧、易损斑块破裂、内皮功能紊乱、血管增生、炎症和糖脂代谢等密切相关。深入研究visfatin，有助于揭示相关疾病的发病机制，为糖尿病、冠心病及其他相关性疾病的防治提供新的思路和方法。

在鱼类研究领域，脂肪代谢是影响鱼类生长、发育、繁殖以及肉质品质的重要因素。不同鱼类的脂肪代谢存在差异，探究其分子机制对于优化鱼类养殖、提高渔业生产效益具有重要意义。目前，关于鱼类脂肪代谢相关基因的研究不断深入，但对于visfatin基因在鱼类中的研究还相对较少。开展对鱼类visfatin基因的克隆、表达丰度与基因全序列研究，能够丰富鱼类脂肪代谢的分子生物学理论，为深入理解鱼类脂肪代谢调控机制奠定基础，同时也为鱼类的遗传育种和健康养殖提供理论依据。

1.2国内外研究现状

在哺乳动物中，visfatin的结构、功能及与疾病的关系已得到较为广泛的研究。人visfatin基因位于第7染色体长臂7q22.17至7q31.33之间，全长37.4Kb，由11个外显子和10个内含子组成，外显子/内含子的剪接符合AG/GT剪接规律。由于不同剪接方式，可产生3种长短不一的转录产物，编码区为1476bp，可翻译含491个氨基酸残基的52kDa蛋白。其5’端转录起始上游由富含GC碱基的近端启动子区和富含AT碱基的远端启动子区组成，包含多种转录因子结合位点以及激素和化学应答调控元件，且具有复杂的遗传变异性，已发现多个单核苷酸多态性位点和插入/缺失突变。

visfatin在骨髓、肝、肌肉等多种组织中均有表达。它可结合并激活胰岛素受体，模拟胰岛素作用，促进脂肪组织分解、合成和蓄积，与肥胖相关；能促进血管平滑肌细胞成熟，参与炎症反应及细胞分化和凋亡过程；对糖脂代谢的调节作用及其他多种功能参与相关疾病的发病机制，如在2型糖尿病胰岛素抵抗中起重要作用，与冠心病的发生和发展可能有关。

然而，在鱼类方面，相关研究起步较晚，研究内容也相对有限。目前已对部分鱼类的一些脂肪代谢相关基因进行了研究，但对于visfatin基因的研究报道相对较少。不同鱼类的脂肪代谢特点和调控机制存在差异，开展多种鱼类visfatin基因的研究，有助于全面了解鱼类脂肪代谢的分子机制。

1.3研究目标与内容

本研究以银鲫、白鲢、草鱼和团头鲂等几种常见经济鱼类为研究对象，旨在深入探究鱼类visfatin基因的相关特性。具体研究目标如下：一是成功克隆这几种鱼的visfatin基因，获得其