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菊花高频再生体系构建与FT基因农杆菌转化技术研究

一、引言

1.1研究背景与意义

菊花（Chrysanthemummorifolium）作为世界著名的观赏花卉，在全球花卉产业中占据重要地位。其花色丰富、花型多样，不仅具有极高的观赏价值，还在药用、茶饮等领域有着广泛应用，深受人们的喜爱。然而，菊花的繁殖过程存在一些局限性，传统繁殖方式如扦插、分株等，繁殖速度较慢，且易受环境因素影响，难以满足大规模生产和品种推广的需求。同时，菊花在自然条件下，其遗传性状相对稳定，通过常规育种手段进行品种改良，周期长、效率低，难以快速获得具有优良性状的新品种。

随着生物技术的不断发展，植物组织培养和基因工程技术为解决菊花繁殖和品种改良问题提供了新的途径。建立菊花高频再生体系，能够实现菊花的快速繁殖，提高繁殖效率和种苗质量，为菊花的大规模生产提供技术支持。而农杆菌介导的基因转化技术，可以将外源基因导入菊花细胞中，实现对菊花特定性状的定向改良，如花期调控、花色改变、抗性增强等。FT（FLOWERINGLOCUST）基因作为调控植物花期的关键基因，在花卉花期调控研究中具有重要的应用价值。将FT基因转化到菊花中，有望实现对菊花花期的精准调控，延长菊花的观赏期，提高其经济价值。因此，开展菊花高频再生体系建立及农杆菌介导FT基因转化的研究，对于菊花的繁殖、品种改良和花卉产业的发展具有重要的科学意义和应用价值。

1.2国内外研究现状

在菊花高频再生体系研究方面，国内外学者进行了大量的探索。自1968年以茎段为外植体开发了菊花的组培技术以来，各国学者分别以菊花的茎尖、小花、花梗、叶片、花瓣、子房、叶柄、花托等多种器官或组织为外植体，相继建立了再生体系。研究表明，不同外植体的再生能力存在差异，叶片、茎段等外植体因其来源广泛、操作方便，成为常用的外植体材料。在培养基的选择上，多数研究采用MS培养基，也有部分研究采用B5培养基。植物生长调节剂的种类和浓度配比是影响菊花再生的关键因素，生长素和细胞分裂素的合理组合能够有效促进愈伤组织的诱导和不定芽的分化。此外，外植体的大小、成熟程度、季节等因素也会对再生率产生影响。例如，有研究发现半成熟的叶片和茎段具有较高的芽再生率，冬季取得的外植体比夏季能够再生出更多的芽。近年来，体细胞胚途径高频再生体系的建立也取得了一定进展，研究指出高浓度的细胞分裂素类物质可以诱导体细胞胚的发生，光周期和蔗糖浓度也会影响菊花体细胞胚状体的发生。

在农杆菌介导的菊花基因转化研究方面，1989年首次成功利用农杆菌介导法获得转基因菊花，此后相关研究不断深入。目前，已经有多种基因通过农杆菌介导法被导入菊花中，如改变花色的基因、提高抗性的基因等。然而，菊花的遗传转化效率仍然较低，影响因素包括基因型、外植体类型、农杆菌菌株、转化条件等。不同基因型的菊花对农杆菌侵染的敏感性存在差异，筛选合适的基因型是提高转化效率的关键之一。外植体类型也会影响转化效果，叶片、无芽茎段以及花梗等常用于遗传转化的外植体，其转化效率各不相同。此外，农杆菌菌株的选择、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、筛选压力等转化条件的优化，对于提高转化效率也至关重要。在FT基因转化方面，虽然FT基因在多种植物中的花期调控机制已有深入研究，但将其转化到菊花中的报道相对较少，转化技术和转化效果仍有待进一步优化和提高。

1.3研究目标与内容

本研究旨在建立高效稳定的菊花高频再生体系，优化农杆菌介导FT基因转化的条件，研究FT基因对转化菊花生长发育和花期的影响，为菊花的品种改良和花期调控提供理论和技术支持。具体研究内容如下：

菊花高频再生体系建立：筛选适合菊花高频再生的基因型，优化外植体处理方法，包括消毒方式、切割大小等。研究不同植物生长调节剂的种类和浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响，比较MS、B5、White等不同培养基配方对菊花再生的效果，建立稳定、高效的菊花高频再生体系。

农杆菌介导的FT基因转化：构建含有FT基因的表达载体，选用合适的农杆菌菌株，如AgrobacteriumtumefaciensLBA4404，将FT基因导入菊花愈伤组织中。优化转化条件，包括菌液浓度、侵染时间、共培养时间等，筛选抗性愈伤组织，并通过PCR、Southernblot等分子生物学技术对转基因植株进行鉴定。

转化菊花中FT基因对其生长发育和花期的影响：对转化后的菊花植株进行生长观察，测定株高、茎粗、叶片数等形态指标。研究FT基因对菊花花芽分化、花期、花径、花色等观赏性状的影响，分析FT基因在不同生长时期的表达水平，探讨FT基因调控菊花花期的分子机制。

二、菊花高