《大熊猫外周血涂片制备与染色技术规程》.docxVIP

ICS11.220CCSB41

团体标准

T/CVMA335—2026

大熊猫外周血涂片制备与染色技术规程

TechnicalproceduresforpreparationandstainingofGiantPandaperipheralbloodsmears

2026-1-14发布2026-1-14实施

中国兽医协会发布

T/CVMA335—2026

I

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由中国大熊猫保护研究中心提出。

本文件由中国兽医协会归口。

本文件起草单位：中国大熊猫保护研究中心、四川大学华西医院、成都辉跃中科生物科技有限公司、唐山动物园。

本文件主要起草人：李才武、陈豪、毛志刚、陈思、刘超男、朱艳、李承瑶、杨梦芳、陈丹钰、周汝学、李德生、魏荣平、张贵权、冯刚。

T/CVMA335—2026

1

大熊猫外周血涂片制备与染色技术规程

1范围

本文件规定了大熊猫外周血涂片制备、染色和质量评估、废弃物处理、记录与报告的方法。

本文件适用于大熊猫外周血液样本血涂片的制备操作，包括野生大熊猫的救护、圈养大熊猫日常体检及疾病诊疗等场景下的血涂片制作。本文件规范大熊猫外周血涂片的制备流程，保证血涂片的质量，为大熊猫血液细胞形态学观察、疾病诊断、健康监测等提供准确可靠的样本基础。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

T/CVMA233大熊猫健康体检规范

T/CVMA235大熊猫血液采集技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

血细胞形态学检查bloodcellmorphologicalexamination

对血液有形成分质量的检查和数量的评估，主要包括对红细胞、白细胞及血小板的大小、形态、染色及结构等方面的检查。

3.2

血涂片bloodsmear

血细胞形态学检查的基本方法。将一滴血液样本制成薄层血膜，染色后在显微镜下观察有无细胞数量异常、形态异常，有无病原微生物等结构，以提供诊断信息。通过将被检血液制备成涂片，经过染色后在显微镜下观察其形态，为疾病的筛查与诊断提供依据。

4仪器、试剂与耗材

光学显微镜（配备油镜）、全自动推染片机或者半自动染片机（需人工制备血涂片后机器染色）、载玻片、推片、抗凝血液样本（如EDTA抗凝血）、染色剂（如瑞氏染色、吉姆萨染色等）、甲醇（AR级，无丙酮，用于固定）、蒸馏水或缓冲液（用于染色）、吸水纸。

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5血涂片的制备

5.1人工制备血涂片操作5.1.1人员防护准备

操作人员需穿戴手套、口罩、实验服，避免直接接触血液样本。

5.1.2采血

血液采样方法按照T/CVMA235相关内容进行。采样后应尽快进行血涂片制备，避免使用陈旧性血液样本推片。轻轻摇动抗凝管，使血液混匀。

5.1.3滴样

用微量移液器或毛细管吸取5~20μl血液，将血滴滴在载玻片一端，距边缘约1cm处或者整片的3/4处的中央。

5.1.4推片

推玻片以与载玻片30°~45°角接触血滴，待血液沿推玻片边缘展开，快速、平稳地向前推成薄层，形成舌形或椭圆形的血膜。推片时应保持力度均匀，避免细胞堆积或血膜过厚。

5.1.5干燥

将涂片置于室温下自然晾干，避免加热或吹干，防止细胞变形。天气寒冷或潮湿时，为避免干燥时间过长导致细胞变形、皱缩，可置于37℃温箱促干。

5.1.6染色

5.1.6.1瑞氏染色法。滴加3~5滴瑞氏染液覆盖涂片，染色0.5min~1min。加入等量或稍多的缓冲液与染液混合，混匀，继续染色5min~10min。用蒸馏水轻轻冲洗，去除多余染液，直立晾干。

5.1.6.2吉姆萨染色法。将涂片先用甲醇固定3min~5min，固定完成后浸入吉姆萨染液中，染色15min~30min，用蒸馏水冲洗，晾干。

5.2全自动血涂片制备仪制备血涂片操作

5.2.1准备

5.2.1.1设备与试剂准备

全自动推染片机或者半自动染片机（需人