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单菌株与混合菌株发酵产纤维素酶的特性及效能比较研究

一、引言

1.1研究背景与意义

纤维素作为地球上分布最广、含量最丰富的可再生资源，占植物干重的35％-50％，每年全球植物体生成量高达1500亿t干物质，其中一半以上为纤维素和半纤维素。我国每年农作物秸秆总产量约7亿吨，仅农业生产中形成的农作物残渣（如稻草、玉米秸、麦秸等）就有5亿吨之多。然而，由于纤维素的结构特点，目前仅有20%的纤维素物质被开发利用，大量的纤维素物质因无法分解利用而废弃，这不仅造成了资源的极大浪费，还对环境产生了污染。

纤维素酶是一类能够将纤维素降解为葡萄糖的多组分酶系的总称，它不是单成分酶，而是由多个酶起协同作用的多酶体系，主要包括内切β-1,4-葡聚糖酶（EG）、外切葡聚糖酶（CBH）和β-葡萄糖苷酶（BG）。EG一般作用于纤维素内部的非结晶区，随机水解β-1,4-糖苷键，产生大量带非还原性末端的小分子纤维素；CBH作用于纤维素线状分子末端的β-1,4-糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子；BG一般将纤维二糖水解成葡萄糖。这三种酶协同作用，可将纤维素彻底水解为葡萄糖。

纤维素酶在多个领域有着广泛且重要的应用。在能源领域，纤维素酶可将纤维素转化为可发酵性糖，进而发酵产生乙醇等生物燃料，有助于缓解当前的能源危机，减少对传统化石能源的依赖，推动可再生能源的发展。在食品工业中，纤维素酶可用于果蔬和蔬菜加工，使植物组织软化和膨润，避免过度加热蒸煮和酸碱处理导致的香味和维生素损失，还可分解果蔬制成果酱，分解蘑菇制成调味料；在茶叶加工中，与热水浸提法结合，可缩短抽提时间，提高水溶性较差成分的抽提率，并保持茶叶原有的色、香、味；在大豆加工中，能促进大豆快速脱皮，破坏细胞壁，使蛋白质和油脂完全分离，提高提取率，降低成本。在饲料工业中，纤维素酶添加到饲料复合酶中，可以提高禽畜的增重量、产乳量和产蛋量，增强禽畜抗病和适应环境的能力。

目前，纤维素酶的生产方法主要有单菌株发酵和混合菌株发酵。单菌株发酵是利用单一菌种进行发酵生产纤维素酶，其优点是发酵过程易于控制，产品质量相对稳定，但存在产酶活力较低、酶系不够完整等问题。而混合菌株发酵是利用两种或两种以上的菌种进行协同发酵，不同菌种之间可以相互协作，发挥各自的优势，从而有可能提高纤维素酶的产量和质量，使酶系更加完整，并且还可能缩短发酵周期，但混合菌株发酵的过程较为复杂，菌种之间的相互作用难以预测和调控。

深入研究单菌株和混合菌株发酵产纤维素酶，对于提高纤维素酶的产量和质量，降低生产成本，推动纤维素资源的高效利用具有重要意义。这不仅有助于解决能源危机、食物短缺和环境污染等问题，还能为相关产业的发展提供有力的技术支持，促进经济的可持续发展。

1.2国内外研究现状

在单菌株发酵产纤维素酶方面，国内外学者进行了大量的研究。工业生产的纤维素酶主要由真菌产生，如木霉（Trichodermasp.）、青霉（Penicilliumsp.）、曲霉（Aspergillussp.）以及腐质霉（Humicolasp.）等。其中里氏木霉（T.reesei）是研究最为广泛的菌种之一，它产生的纤维素酶具有酶谱全、活力高的特点。自20世纪60年代以来，从野生菌株T.reeseiQM6a出发，通过筛选育种工作，得到了如QM9414、RutC30和MCG77等菌株，它们能够产生较高的内切型和外切型葡聚糖酶活力，是目前国内外生产酸性纤维素酶的主要菌种。国内学者对里氏木霉的发酵条件优化也做了很多工作，王菁莎等人对里氏木霉Lw-1采用固态发酵技术，以廉价的麸皮和玉米秸秆为碳源，1%硫酸铵为氮源，在秸秆粉：麦麸=1：1、料水比为1：2的固体发酵培养基上进行固态发酵，通过正交实验分析，在发酵温度为28°C，初始pH值为5.5，发酵周期为72h时，产酶活力最高，测得发酵液中FPA酶活119.417u/g干物质，CMC酶活为452.433U/g干物质。康东亮等人对里氏木霉R3进行液体深层发酵，发现发酵96h时，维持pH值在5.0时FPA酶活力最高，维持pH值在4.5时CMC酶活力最高，采取分段控制温度、pH值和溶氧时，发酵时间明显延长，产酶高峰由96h延长至120h，产酶量也大大增加，发酵温度控制在30°C时虽然峰值出现稍晚，但峰值最大，酶活力最高，FPA酶活达到48.9FPIU/mL，CMC酶活达到321.68IU/mL。

在混合菌株发酵产纤维素酶方面，近年来也受到了越来越多的关注。研究发现，不同菌种之间的协同作用可以提高纤维素酶的产量和酶系的完整性。高星星等人以碱性双氧水处理过的玉