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小鼠微量甲醛炎性痛模型构建及脊髓背角c-fos表达机制探究

一、引言

1.1研究背景

疼痛作为一种复杂的生理心理现象，是临床上最常见的症状之一，严重影响着患者的生活质量。国际疼痛研究协会（IASP）将疼痛定义为“由真正存在或潜在的身体组织损伤所引起的不舒服知觉和心里感觉”。炎性痛作为疼痛的一种重要类型，是由炎症反应引发的疼痛状态，在关节炎、术后疼痛、创伤后疼痛等多种临床疾病中广泛存在，其发病机制涉及炎症介质释放、神经末梢敏化、中枢神经系统可塑性改变等多个复杂环节。炎性痛不仅给患者带来身体上的痛苦，还常导致焦虑、抑郁等心理问题，给患者的生活和工作造成极大困扰，因此，对炎性痛机制的深入研究以及有效治疗方法的探索一直是医学领域的重要课题。

甲醛炎性痛模型作为研究炎性痛的经典动物模型，在疼痛研究领域具有举足轻重的地位。该模型通过向动物皮下注射微量甲醛溶液，能够诱导出明显的疼痛反应，且这种疼痛反应具有两个明显的时相。第一时相为皮下注射甲醛后立即表现出的疼痛行为，主要由甲醛直接刺激神经末梢所引起；第二时相为皮下注射甲醛约20分钟后发生的疼痛行为，是由于局部慢性炎症导致的伤害性信息持续传入引起的。这两个时相分别模拟了临床上急性疼痛和慢性炎性疼痛的部分特征，为研究不同阶段疼痛的发生机制和治疗策略提供了良好的实验平台。

在药理学研究中，甲醛炎性痛模型被广泛应用于新型镇痛药物的研发和筛选。通过观察药物对甲醛诱导的小鼠疼痛行为的影响，可以快速评估药物的镇痛效果和作用机制。在神经生物学研究中，该模型有助于深入探讨疼痛信号在中枢神经系统的传导和调控机制，例如研究脊髓背角神经元在疼痛信号传递中的作用以及相关神经递质和受体的变化等。其制作方法相对简单，致痛刺激持久且稳定，重复性好，能够为研究提供较为可靠的实验数据，是目前国际公认的一种较好的研究药物镇痛作用和疼痛机制的模型，已普遍应用于疼痛机制研究及镇痛药物评价。

1.2研究目的和意义

本研究旨在成功建立小鼠微量甲醛炎性痛模型，为后续深入研究炎性痛机制提供可靠的实验基础。通过该模型，精确观察小鼠在微量甲醛刺激下的疼痛行为学表现，全面记录疼痛反应的时程和强度变化，为炎性痛研究提供量化的数据支持。

同时，本研究聚焦于脊髓背角c-fos的表达情况。脊髓背角作为痛觉信号传递的关键部位，在炎性痛发生发展过程中起着核心作用。c-fos作为一种即早基因，其表达变化能够敏锐地反映神经元的激活状态。深入探究脊髓背角c-fos在小鼠微量甲醛炎性痛模型中的表达变化规律，对于揭示炎性痛的中枢敏化机制具有重要意义。这不仅有助于我们从分子层面理解炎性痛的发病机理，还能为临床开发更加有效的炎性痛治疗策略提供坚实的理论依据，有望推动疼痛医学领域的发展，为广大炎性痛患者带来福音。

二、小鼠微量甲醛炎性痛模型的建立

2.1实验材料准备

实验动物：选取健康成年昆明小鼠，体重在20-25g之间，雌雄各半。昆明小鼠具有繁殖能力强、生长快、对环境适应能力较好等优点，在各类医学实验中广泛应用，其遗传背景相对稳定，能够为实验结果提供可靠的基础。小鼠购自[具体实验动物供应商名称]，动物生产许可证号为[具体许可证号]。实验前将小鼠置于温度（22±2）℃、相对湿度（50±10）%的环境中适应性饲养1周，自由摄食和饮水，保持12h光照/12h黑暗的昼夜节律，以确保小鼠在实验前处于良好的生理状态，减少环境因素对实验结果的干扰。

实验药品：甲醛溶液（分析纯），购自[药品供应商名称]。使用前，用生理盐水将甲醛溶液稀释成浓度为5%的甲醛溶液，现用现配，以保证甲醛溶液的活性和浓度准确性。甲醛作为一种化学刺激物，在该模型中是诱导小鼠产生炎性痛的关键物质，其浓度的精确控制对于模型的成功建立和实验结果的可靠性至关重要。

实验器材：微量进样器（50μl），用于准确抽取和注射微量的甲醛溶液，其精度能够满足实验对药物剂量的严格要求；电子天平，用于称量小鼠体重，确保实验分组时小鼠体重的均衡性，为实验结果的准确性提供保障；塑料鼠笼，为小鼠提供舒适的生活环境，保证小鼠在实验过程中的正常生理活动；手术器械一套，包括镊子、剪刀等，用于后续可能涉及的小鼠解剖操作；恒温培养箱，用于维持实验所需的温度条件，确保小鼠在适宜的环境中进行实验；光学显微镜，用于观察小鼠脊髓组织切片，以便分析脊髓背角c-fos的表达情况；图像分析系统，与光学显微镜配套使用，能够对显微镜下观察到的图像进行量化分析，提高实验结果的准确性和客观性。

2.2实验环境设置

将小鼠饲养于专门的动物实验室内，实验环境温度严格控制在（22±2）℃。适宜的温度有助于维持小鼠正常的生理代谢和体温调节功能，避免因温度过高或过低对小鼠的生理状态和疼痛反应产生干扰。例如