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光透明剂对生物组织二次谐波成像的影响：基于兔子动脉血管壁的研究

一、引言

1.1研究背景

生物组织成像技术作为窥探生命奥秘的重要手段，在医学诊断与生物研究领域扮演着举足轻重的角色。从传统的光学显微镜到如今的多种先进成像技术，每一次技术革新都为科研人员和医疗工作者打开了一扇通往微观世界的新窗口，推动着相关领域的飞速发展。

在医学诊断中，准确清晰的生物组织成像能够辅助医生早期发现病变，为疾病的精准诊断和有效治疗提供关键依据。例如，通过成像技术可以清晰观察肿瘤组织的形态、大小、位置及与周围组织的关系，有助于制定手术方案、评估治疗效果和监测疾病复发。在生物研究方面，成像技术帮助科研人员深入探究生物分子、细胞、组织和器官的结构与功能，揭示生命活动的基本规律，为攻克各种生物学难题提供重要的数据支持。

二次谐波成像技术（SecondHarmonicGenerationImaging，SHG）作为一种现代非线性光学显微成像技术，近年来在生物医学领域展现出巨大的应用潜力。它利用光与物质相互作用时产生的二次谐波信号进行显微成像或探测。二次谐波产生需要满足两个关键条件：一是介质具有非中心对称性，在电偶极子近似下，具有中心对称性的介质其二阶电极化率张量为零，无法产生二次谐波信号；二是满足相位匹配条件，这直接决定着非线性光学过程的效率。当二次谐波产生过程完全满足相位匹配条件时，传播中的倍频光波和不断产生的倍频极化波相位一致，相互干涉，二次谐波强度从零开始逐渐增大，直至基频波的功率完全转为二次谐波的功率，从而获得最大的二次谐波输出功率。

二次谐波成像技术具有诸多独特优势，使其在生物医学研究和临床应用中备受关注。它具有较高的三维空间分辨率，传统的激光共焦显微镜采用共焦小孔成像，而二次谐波显微成像产生的信号光由于非线性效应的强局域特性被局限在焦点附近很小的区域里，在成像过程中非焦点区域发光对测量结果的影响大大减小，因此不采用共焦小孔就可以实现高分辨率成像，且具有较高的信噪比。通常激发光源采用近红外的飞秒激光器，减小了对生物样品的光损伤，降低了光漂泊，增加了样品的穿透深度。二次谐波信号是样品的原发性信号，成像过程不需要使用染料进行染色，避免了光化学毒性及染色过程中的物理损伤，同时也使该技术可用于很多被测样品不能进行荧光标记的成像探测。利用二次谐波信号进行成像或探测时，其相干性使其对样品局部微观结构具有较高的敏感性，探测到的二次谐波信号不仅能反映与样品有关的强度信息，还可以反映样品的分子取向、排列方式等局部微观结构，这些重要而本质的信息可以通过分析信号的角度分布或偏振特性等得到。此外，二次谐波显微镜虽未商品化，但双光子荧光显微系统已经商品化，二次谐波成像显微镜可以很容易地在其基础上经过简单改造获得，如通过更换滤光片改造而成，耗费较小。

然而，生物组织内部各种成分折射率的高度不均匀性，导致生物组织对光的强散射，这极大地限制了光在生物组织中的穿透深度，使得光子很难达到更深的组织，进而严重制约了二次谐波成像的深度和对比度。以致激光成像技术通常只能应用在生物组织较浅层的诊断与成像，大大限制了激光在生物医学领域的广泛应用。为了突破这一困境，人们进行了诸多尝试，如引进激光导光光学纤维结合医用激光器用于医学诊断和治疗，但由于成本较高、传输损耗以及操作控制等方面的问题，该技术目前尚难以普及。

1997年，TuchinV.V.提出了光透明技术，为解决上述问题提供了新的思路。该技术是指在不会对生物组织造成不可恢复的损伤的前提下，通过施加光透明剂改善生物组织中的散射体与基质（胞液和组织间液）间的折射率匹配，降低生物组织对光的散射，以达到光透明效果。光透明剂能够扩散到生物组织内，促进组织细胞脱水，从而提高细胞内外、细胞之间的折射率匹配，从宏观上讲，就是提高了生物组织中的散射介质与周围成份之间的折射率匹配，最终降低生物组织对光的散射作用，有效地提高光在生物组织中的穿透深度，为生物组织生理和病理的临床早期无损诊断提供更全面更准确的信息。因此，研究光透明剂对生物组织二次谐波成像的影响具有重要的理论和实际意义，有望为生物医学成像技术的发展开辟新的道路，推动相关领域的进一步发展。

1.2研究目的与意义

本研究聚焦于光透明剂对生物组织二次谐波成像的影响，旨在深入探究光透明剂在生物组织二次谐波成像过程中所发挥的作用及其内在规律。通过系统性地研究不同光透明剂对各类生物组织二次谐波成像的影响，分析光透明剂作用下生物组织光学特性的改变，以及这些改变如何具体作用于二次谐波成像的分辨率、对比度、成像深度等关键成像参数，从而揭示光透明剂与生物组织二次谐波成像之间的内在联系。

从理论层面而言，该研究具有重要意义。它能够进一步丰富和完善光与生物组织相互作用的理论体系，深