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黑麦草内生真菌生物学、生理学及其抑菌特性研究

摘要

多年生黑麦草（Loliumperenne）作为一种优良的牧草和草坪草，在发展草地畜牧业和景观草坪等方面发挥着重要作用。内生真菌（Neotyphodium）具有提高寄主抵御生物和非生物因素胁迫的能力。本研究以坪用多年生黑麦草为供试材料，进行了黑麦草中内生真菌的检测与分离、分别测定了内生真菌在5种培养基、5个酸碱梯度、7个温度梯度、9种碳源及9种氮源上的生长；测定了在离体对峙培养条件下，内生真菌与细交链孢菌（Alternariaalternata）、根腐离蠕孢（Bipolarissorokiniana）、新月弯孢菌（Curvularialunata）、德氏霉（Drechslerasp.）等四种病原真菌之间的相互作用以及内生真菌在氨基酸盐液体培养基中发酵获得的次生代谢产物对上述四种病原真菌生长的影响；在盆栽试验中，测定了根腐离蠕孢侵染下内生真菌对黑麦草叶片生理指标的影响。主要研究结果如下：

对爱神特（Accent）、美达利（Medary）、顶峰（Pinnacle）和球道（Fairway）等四个黑麦草品种进行了内生真菌检测，种子中带菌率依次为37.8%、39.2%、51.2%和52.6%；分别从四种黑麦草E+植株的叶鞘部位分离得到四个菌系、20个内生真菌菌株，根据形态学特征，均为Neotyphodium属。

在生物学特性测定中，四株内生真菌N-ast、N-mdl、N-tp和N-qd的最适生长培养基为燕麦粉琼脂培养基、最适生长pH范围pH7-9、最适温度为25℃。在生理学特性测定中，纤维素酶是最易被内生真菌利用的碳素；胰蛋白胨、酪蛋白胨、脯氨酸和蛋白胨是最易被内生真菌利用的氮素。

离体平板对峙试验中，四株内生真菌对参试的四种病原真菌表现出不同程度的拮抗作用。其中N-ast菌株对根腐离蠕孢和新月弯孢菌表现出较强的拮抗作用，抑制率分别为46.24%、45.50%；N-qd菌株对细交链孢菌和德氏霉表现出较强的拮抗作用，抑制率分别为44.67%、46.62%。

N-ast、N-mdl、N-tp和N-qd菌株的次生代谢产物可有效地抑制病原真菌的菌落生长和孢子萌发，其中N-qd菌株次生代谢产物抑菌活性最高，对细交链孢菌、根腐离蠕孢、新月弯孢菌、德氏霉的菌落生长抑制率分别为17.79%、57.20%、33.79%、41.52%；对孢子萌发的抑制率分别是78.82%、86.67%、85.54%、81.03%。

根腐离蠕孢侵染后，内生真菌降低了黑麦草叶内丙二醛（MDA）的含量，提高了黑麦草叶内游离脯氨酸（Pro）的含量以及过氧化氢酶（CAT）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性。其中顶峰品种E+叶片中MDA含量比E-叶片降低了60%；爱神特品种E+叶片中Pro含量比E-叶片升高了69%；顶峰品种E+叶片中CAT活性比E-叶片升高了25%；球道品种E+叶片中PAL活性比E-叶片升高了31%。

关键词

黑麦草；内生真菌；抑菌特性；病虫害防治

一、引言

1.1黑麦草主要病害

黑麦草作为广泛种植的牧草和草坪草，面临着多种病害的威胁。在众多病害中，由细交链孢菌（Alternariaalternata）引起的叶斑病较为常见。发病初期，叶片上会出现水渍状小斑点，随后逐渐扩大为圆形或不规则形病斑，病斑边缘呈褐色，中央灰白色，严重时病斑会连片，导致叶片枯黄坏死。根腐离蠕孢（Bipolarissorokiniana）引发的根腐病对黑麦草的危害也不容小觑。它主要侵染黑麦草的根部，使根系变黑腐烂，植株生长受阻，地上部分表现为叶片发黄、枯萎，严重影响黑麦草的产量和质量。新月弯孢菌（Curvularialunata）常导致黑麦草叶片出现褐色至黑色的新月形病斑，在高温高湿环境下，病情发展迅速，会严重降低黑麦草的观赏性和饲用价值。德氏霉（Drechslerasp.）引起的叶枯病，会使黑麦草叶片从叶尖开始逐渐干枯，严重影响光合作用，进而影响植株的生长发育。这些病害不仅影响黑麦草的正常生长，还会降低其经济价值，给草地畜牧业和景观草坪建设带来巨大损失。因此，寻找有效的防治方法迫在眉睫。

1.2黑麦草-内生真菌共生体

内生真菌是一类在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部，而不引起植物组织明显病变的真菌。黑麦草与内生真菌形成的共生体在生态系统中具有独特的地位。内生真菌通常存在于黑麦草的叶鞘、叶片、茎和种子等组织内部。在叶鞘中，内生真菌以菌丝体的形式分布于细胞间隙，与叶鞘细胞紧密接触；在叶片中，主要沿着叶脉和叶肉细胞间隙生长；在茎中，分布于维管束周围的组织中