新城疫病毒NDV F和HN基因的克隆解析与HN基因真核表达载体构建探究.docxVIP

新城疫病毒NDVF和HN基因的克隆解析与HN基因真核表达载体构建探究

一、引言

1.1研究背景

新城疫（Newcastledisease，ND）是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性传染病，对全球养禽业造成了巨大的经济损失。国际兽疫局（OIE）将其列为A类传染病，我国也将其列为一类动物疫病。NDV的宿主范围广泛，几乎涵盖所有禽类，包括鸡、火鸡、鸭、鹅、鸽等常见养殖禽类以及众多野禽。感染后的禽类会出现严重的症状，如呼吸困难、腹泻、神经症状等，发病率和死亡率均很高，给养殖户带来沉重打击。

2024年，巴西作为全球最大鸡肉出口国，因最南部的南里奥格兰德州出现一例新城疫病例，暂停了对中国、欧盟等44个国家的禽肉出口，这不仅对巴西的家禽养殖业造成了直接的经济损失，还引发了国际市场上禽肉价格的波动。在我国，尽管长期以来采取了以接种疫苗为主的综合防制措施，但每年仍有部分养殖场因防控不当，出现该病的非典型症状散在流行，主要表现为呼吸道症状、产蛋下降、蛋壳质量下降等，严重影响养殖效益。在高密度饲养的养鸡场环境里，鸡只之间密切接触，一旦有病毒传入，很容易引发全场感染。加之病毒毒力强，大量鸡只死亡的情况屡见不鲜。这不仅导致养鸡产量大幅下降，还会影响到后续的加工、销售等环节，引发鸡肉价格波动，对整个养鸡行业的经济链造成冲击，养殖户的生计也会因此受到严重威胁。

在NDV的基因组结构中，F（融合蛋白）基因和HN（血凝素-神经氨酸酶蛋白）基因占据着关键地位。F基因编码的融合蛋白，能够促使病毒囊膜与宿主细胞膜融合，从而助力病毒侵入宿主细胞，是病毒感染过程中的关键蛋白；HN基因编码的血凝素-神经氨酸酶蛋白，则在病毒吸附和释放过程中发挥着重要作用，它可以识别宿主细胞表面的受体，促进病毒的吸附，同时还具有神经氨酸酶活性，帮助病毒从感染细胞中释放出来。这两个基因不仅控制着NDV病毒的免疫原性和抗原性，其序列特点更为NDV的遗传进化分析提供了关键材料。通过对F和HN基因序列的测定与分析，可以深入了解病毒的遗传特性、变异规律以及进化趋势，进而为揭示NDV的病原机制提供理论支撑，为防控措施的制定和疫苗的研发奠定坚实基础。

目前，NDV通常采用NDV-LaSota株的疫苗接种，但由于该疫苗的扩散性较强，会污染环境，所以需要研究新型的安全有效的NDV疫苗。将NDV的F和HN蛋白进行分离并分别表达，再进行联合接种，可以克服滴眼疫苗传播中所带来的风险，经过反复感染之后，禽体内会产生免疫应答，提高了禽类应对NDV侵袭的能力。然而NDV病毒的致病机理及其F和HN蛋白的分子生物学特征等方面还不是很清楚，需要通过分子生物学的手段，结合生物信息学分析，找到NDV病毒的关键蛋白F和HN蛋白，为新型疫苗的研发提供依据。

1.2国内外研究现状

国外对NDV的研究起步较早，在基因序列测定和遗传进化分析方面取得了丰硕的成果。早期，科研人员利用传统的测序技术，初步测定了NDV的F和HN基因序列，为后续的研究奠定了基础。随着高通量测序技术的发展，对NDV全基因组序列的测定变得更加高效和准确，使得研究人员能够从更全面的角度分析病毒的遗传特征。通过对大量NDV毒株的基因序列分析，发现了不同基因型的NDV在全球的分布情况。如在欧洲、美洲等地，不同基因型的NDV呈现出一定的地域分布特点，这为当地制定针对性的防控策略提供了依据。在遗传进化分析方面，国外学者运用系统发育树构建等方法，深入探究了NDV的进化关系和演化规律。研究表明，NDV的进化受到多种因素的影响，包括宿主、环境以及病毒自身的变异等。例如，一些研究发现，NDV在不同宿主之间传播时，其基因序列会发生适应性变化，以更好地适应新的宿主环境。而且，通过对不同时期NDV毒株基因序列的比较，揭示了病毒在时间尺度上的进化趋势，发现病毒的某些基因位点会随着时间的推移发生突变，这些突变可能与病毒的毒力、传播能力等生物学特性的改变相关。

国内对NDV的研究也在不断深入，尤其在基因序列和遗传进化方面取得了显著进展。许多科研团队针对国内不同地区的NDV分离株进行了F和HN基因序列测定，分析了这些分离株的基因特征和变异情况。通过对国内大量NDV毒株的研究，发现国内存在多种基因型的NDV，且不同地区的优势基因型有所差异。如在南方部分地区，基因Ⅶ型NDV较为流行；而在北方一些地区，其他基因型的NDV也有一定的分布。这与国内复杂的养殖环境和禽类贸易活动密切相关。在遗传进化分析方面，国内学者结合国内的实际情况，开展了一系列有针对性的研究。通