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病理技术岗位实务操作及考试复习资料

引言

病理技术工作是病理诊断不可或缺的重要组成部分，其质量直接关系到病理诊断的准确性，进而影响临床治疗决策。作为病理技术人员，不仅需要熟练掌握各项操作技能，还需具备扎实的理论基础和严谨的工作态度。本文旨在为病理技术岗位的同仁提供一份涵盖实务操作要点与考试复习策略的参考资料，以期共同提升专业素养与技术水平。

一、实务操作核心技能

（一）组织处理

组织处理是病理制片的基础，其目的是将新鲜组织转变为适合切片的蜡块。

1.标本接收与核对：严格执行“三查七对”，核对标本信息（姓名、性别、年龄、标本部位、送检科室、标本数量等）与申请单是否一致，检查标本固定情况，确认无误后登记编号。对于不合格标本（如固定不当、信息不全），应及时与送检科室沟通。

2.组织固定与取材：

*固定：确保标本及时、充分固定。常用10%中性缓冲福尔马林，固定液量应为标本体积的5-10倍。特殊标本（如骨组织、脂肪组织）需采用相应的固定方法。

*取材：在病理医师指导或按照标准操作规程进行。取材要规范，选取病变与正常组织交界处，大小、厚度适宜（通常不超过2×2×0.3cm），切面平整，避免挤压。记录取材部位及数量。

3.组织脱水、透明与浸蜡：

*脱水：使用梯度乙醇（从低浓度到高浓度）将组织内水分置换出来。关键在于控制温度和时间，确保脱水彻底且组织不过度收缩或硬化。

*透明：常用二甲苯或其他环保透明剂，目的是使组织透明，利于浸蜡。透明应适度，过度会导致组织变脆。

*浸蜡：将透明后的组织浸入融化的石蜡中，使石蜡取代透明剂。石蜡熔点应根据季节和组织类型选择，浸蜡温度和时间需严格控制，确保石蜡充分渗入组织。

4.包埋：将浸蜡后的组织置于包埋框中，倒入融化的石蜡，用镊子调整组织位置，确保切面朝下，平整放置。待石蜡冷却凝固后形成蜡块。包埋要牢固，组织与石蜡结合紧密，无气泡。

5.切片：

*蜡块修整：将蜡块切成规整的长方体，组织切面暴露。

*切片机操作：调整切片机厚度（常规HE切片通常为3-5μm），安装蜡块，进行切片。要求切片完整、连续、无褶皱、无刀痕、厚度均匀。

*捞片与烤片：将切好的蜡片用毛笔或镊子轻轻平铺于40-45℃的温水浴中展平，然后用载玻片捞取，使组织片贴附于载玻片中央。捞片后将载玻片置于烤片机上（60℃左右）烤片1-2小时，使蜡片与载玻片牢固结合，防止脱片。

（二）常规染色技术（HE染色）

HE染色是病理诊断中最基本、最常用的染色方法，能清晰显示组织和细胞的形态结构。

1.脱蜡至水：将烤好的切片依次放入二甲苯（I、II）脱蜡，再经梯度乙醇（100%、95%、80%、70%）至蒸馏水。每步停留时间需足够，确保脱蜡彻底。

2.苏木素染色：将切片浸入苏木素染液中，时间根据染液新旧、室温及切片类型调整（通常数分钟）。染色后用流水冲洗。

3.分化：用1%盐酸乙醇分化，直至细胞核清晰，胞质基本无色，然后立即用流水冲洗终止分化。

4.返蓝：用弱碱性溶液（如温水或稀氨水）返蓝，使细胞核呈鲜明的蓝色。流水冲洗。

5.伊红染色：将切片浸入伊红染液中，染细胞质和细胞外基质，时间通常数十秒至数分钟。

6.脱水、透明、封片：切片依次经梯度乙醇（80%、95%、100%I、100%II）脱水，二甲苯（I、II）透明，最后用中性树胶或合成封片剂封片，加盖盖玻片，注意避免产生气泡。

7.结果判断：细胞核呈蓝色，细胞质、肌纤维、胶原纤维等呈不同程度的红色。背景清晰，对比鲜明。

（三）特殊染色与免疫组织化学染色技术

1.特殊染色：针对特定组织成分或病原体进行染色，如过碘酸-雪夫（PAS）染色显示糖原和真菌，Masson三色染色区分胶原纤维和肌纤维，抗酸染色查找抗酸杆菌等。操作时需严格按照试剂盒说明书或标准操作规程进行，注意试剂配制、温度、pH值及作用时间的控制。

2.免疫组织化学染色（IHC）：

*脱蜡至水：同HE染色。

*抗原修复：根据抗体要求选择合适的修复方法（热修复或酶修复），以暴露抗原决定簇。

*内源性过氧化物酶阻断：常用3%过氧化氢溶液室温孵育，阻断内源性过氧化物酶活性，避免非特异性染色。

*血清封闭：用正常血清孵育，减少非特异性背景染色。

*一抗孵育：滴加特异性一抗，4℃孵育过夜或室温孵育适当时间。阴性对照和阳性对照的设置至关重要。

*二抗孵育：滴加与一抗相应的标记二抗（如HRP标记二抗），室温孵育。

*显色：常用DAB显色剂，显微镜下控制显色时间，待阳性信号清晰且背景适中时终止。

*复染：用苏木素轻度复染细胞核。

*脱水、透明、封片：同HE染色。

*结果判断：阳性信号应定位准确（胞核、胞质或胞