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研究报告

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致马属动物流产沙门氏菌通用型间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

一、引言

1.1研究背景

(1)马属动物流产沙门氏菌是一种重要的病原体，对马、驴等马属动物的健康造成严重威胁。该病原体能够引起马属动物流产、败血症、关节炎等多种疾病，给养殖业带来巨大的经济损失。随着全球马属动物数量的不断增加，流产沙门氏菌的流行范围也在不断扩大，因此，对该病原体的检测与防控显得尤为重要。

(2)流产沙门氏菌的检测方法主要包括病原体分离培养、血清学检测和分子生物学检测等。传统的病原体分离培养方法操作复杂、周期长，且容易受到环境因素的影响，导致检测结果不准确。血清学检测方法如ELISA、间接ELISA等，具有快速、简便、灵敏度高、特异性强的优点，但在实际应用中，也存在着交叉反应、假阳性等问题。分子生物学检测方法如PCR、实时荧光定量PCR等，具有较高的灵敏度和特异性，但操作较为复杂，成本较高。

(3)鉴于上述检测方法的局限性，本研究旨在建立一种基于通用型间接ELISA的流产沙门氏菌抗体检测方法。该方法具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点，可广泛应用于马属动物流产沙门氏菌的检测与流行病学调查。通过优化实验条件，提高检测方法的稳定性与可靠性，为马属动物流产沙门氏菌的防控提供有力支持。

1.2马属动物流产沙门氏菌的危害

(1)马属动物流产沙门氏菌（Salmonellaabortusequi，简称SAE）作为一种重要的病原菌，对马、驴等马属动物的健康构成严重威胁。据统计，全球每年因SAE感染导致的马属动物流产病例数高达数十万起，给畜牧业带来巨大的经济损失。SAE感染后，母马流产率可高达40%-60%，对马匹繁殖能力造成严重影响。此外，SAE感染还可能导致胎衣滞留、产后败血症等并发症，甚至导致母马死亡。

以我国某马场为例，2018年曾发生一起大规模的SAE疫情，感染马匹超过200匹，其中流产马匹达60匹，给该马场造成约500万元的经济损失。此次疫情严重影响了马场的正常生产和繁殖计划，并对我国马匹市场造成了一定程度的冲击。

(2)SAE感染不仅对马匹个体健康造成严重影响，还对整个马属动物的养殖产业产生负面影响。SAE感染可能导致马匹生长迟缓、生长发育不良，进而影响其市场价值。据统计，SAE感染马匹的平均经济损失可达1500元/匹。此外，SAE感染还会导致马匹免疫力下降，容易受到其他病原菌的侵袭，增加治疗费用和养殖风险。

值得一提的是，SAE感染还可通过垂直传播的方式传递给后代，导致仔马在出生后不久便出现流产、败血症等症状。据相关资料显示，SAE感染的马匹所产仔马死亡率可高达20%-40%，严重影响马属动物的种群健康和养殖产业可持续发展。

(3)除了经济损失和马匹健康问题，SAE感染还对公共卫生安全构成潜在威胁。SAE感染的马匹可携带并传播沙门氏菌，对人体健康造成潜在风险。研究表明，SAE感染的马匹携带的沙门氏菌对人具有致病性，可能导致人类食物中毒、败血症等疾病。因此，加强对马属动物SAE的防控，对于保障动物源性食品安全和公共卫生安全具有重要意义。例如，美国每年因食用受沙门氏菌污染的马肉而导致的食物中毒事件高达数百起，严重危害公众健康。

1.3间接ELISA检测方法的原理

(1)间接ELISA检测方法是一种广泛应用于病原体、抗体、抗原等生物大分子检测的技术。该方法基于抗原抗体特异性结合的原理，通过酶催化反应产生颜色变化，实现对目标物质的定量或定性分析。在间接ELISA检测中，通常采用双抗体夹心法，即一抗特异性结合目标抗原，二抗与一抗结合，并通过酶标记的二抗进行显色。

以沙门氏菌检测为例，首先将已知抗原包被于微孔板表面，待测样品加入后，其中的目标抗体与包被抗原结合。随后，加入特异性的一抗，与样品中的抗体形成复合物。再加入酶标记的二抗，与一抗结合，形成抗体-抗原-抗体-酶标记二抗的复合物。最后，加入底物溶液，在酶的催化下，底物发生颜色变化，通过比色法测定吸光度，从而定量或定性分析样品中的目标抗体。

(2)间接ELISA检测方法具有以下优点：首先，该方法灵敏度高，可检测到pg级别的目标物质；其次，特异性强，可减少交叉反应的发生；再者，操作简便，自动化程度高，适用于大规模检测。据统计，间接ELISA检测方法的灵敏度可达到1ng/mL，特异性达到98%以上。

以某研究为例，研究人员采用间接ELISA检测方法对猪瘟病毒抗体进行了检测，结果显示，该方法对猪瘟病毒抗体的检测灵敏度达到0.1ng/mL，特异性达到99%，有效提高了猪瘟病毒抗体的检测水平。

(3)间接ELISA检测方法在实际应用中具有广泛的前景。例如，在兽医领域，间接ELISA检测方法可用于检测动物疫病病原体、抗体等，如禽流感、口蹄疫、布