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锰暴露对大鼠神经元lncRNA与mRNA表达谱的重塑及生物信息学解析

一、引言

1.1研究背景

锰（Manganese，Mn）作为一种在工业领域具有重要价值的过渡金属元素，在化学元素周期表中位居第25位，原子序数为25，展现出独特的物理与化学性质，如较高的硬度、熔点以及多样化的化合价，这些特性使其在化学反应中表现活跃。在工业生产里，锰有着极为广泛的应用。在钢铁行业，锰是不可或缺的合金元素，能有效提高钢的强度、硬度与耐磨性，显著改善钢的加工性能。例如，在高强度低合金钢中添加适量的锰，可大幅提升钢材的强度与韧性，在合金钢中，锰含量在1.0-17.0%，能改善多种性能，像耐磨性、耐腐蚀性等，而在不锈钢中，1.0-2.0%的锰含量可增强其耐腐蚀性和强度，素有“无锰不成钢”的美誉。在电池制造领域，锰酸锂电池因成本低、安全性高，被大量应用于电动工具、电动汽车等方面。同时，在化学工业中，锰用于生产各类锰化合物，高锰酸钾作为一种强氧化剂，广泛应用于消毒、漂白等领域。

锰不仅在工业领域发挥关键作用，也是人体必需的微量元素之一，对维持正常生理功能意义重大。锰参与骨骼的正常生长与发育过程，在活化硫酸软骨素合成的酶过程中发挥作用，进而促进骨质合成；还积极参与正常的糖代谢与脂肪代谢，刺激免疫细胞增殖；在维持正常脑功能方面，锰与思维、情感、智能发展以及行为紧密相关；此外，甲状腺素的酶催化过程也离不开锰的参与。中国营养学会建议，14岁以上人群每天应摄入4.5毫克锰，孕妇相比同龄人每天要多摄入0.3-0.4毫克，正常情况下，人体通过均衡饮食即可满足对锰的需求。

然而，当人体过量暴露于锰时，会带来诸多危害。急性锰中毒通常是由于误服高锰酸钾溶液所致，轻度中毒会引发口腔黏膜糜烂、恶心、胃部疼痛等不适；中度中毒表现为胃肠道黏膜坏死、腹痛、便血；重度中毒则可能导致休克甚至死亡。慢性锰中毒常见于长期接触锰的职业人群，一般在接触锰3-5年后出现症状，早期症状包括头晕、头痛、心悸、肢体酸痛无力、多汗以及神经衰弱综合征，如睡眠障碍、记忆力减退等，随着病情发展，还会出现运动功能障碍，严重者会出现类似帕金森病的症状，如运动迟缓、震颤、肌强直等，对患者的生活质量造成严重影响。

尽管当前对锰的神经毒性开展了多方面研究，涵盖神经细胞凋亡、神经递质代谢紊乱、突触传导功能障碍，以及基因易感性和遗传多态性等领域，但锰致神经毒性的分子机制仍未完全明晰。随着生物信息学技术的迅猛发展，为深入探究锰神经毒性的分子机制提供了新的路径。长链非编码RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）作为一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA，虽不具备编码蛋白质的能力，却在基因表达调控中发挥关键作用，参与染色质修饰、转录调控、转录后调控等过程，与多种疾病的发生发展密切相关。研究锰暴露下大鼠神经元中lncRNA与mRNA表达谱的变化，通过生物信息学方法进行深入分析，有助于挖掘锰致神经毒性的潜在分子机制，为预防和治疗锰中毒相关神经系统疾病提供理论依据与新的靶点。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过分析锰暴露下大鼠神经元中lncRNA与mRNA表达谱的改变，并运用生物信息学方法进行深入剖析，全面揭示锰致神经毒性的潜在分子机制。具体而言，通过检测不同浓度锰染毒后大鼠原代海马神经元中lncRNA及mRNA的表达情况，运用生物信息学分析方法，对差异表达的lncRNA和mRNA进行功能注释与代谢通路分析，构建共表达网络，预测可能的竞争性内源RNA（ceRNA）调控通路，并通过实验初步验证，为深入理解锰的神经毒性机制提供理论依据。

本研究具有重要的理论意义和现实意义。在理论层面，有助于填补当前对锰神经毒性分子机制认识的空白，拓展对lncRNA在神经毒性中作用的理解，为进一步研究锰中毒相关神经系统疾病的发病机制奠定基础。在现实应用中，为锰中毒的早期诊断、预防和治疗提供新的生物标志物与潜在治疗靶点，对保护职业暴露人群和普通人群的健康，降低锰中毒相关疾病的发生率，提高患者生活质量具有重要的指导作用，也为制定更加科学合理的职业卫生标准和环境保护政策提供理论支持。

二、材料与方法

2.1实验材料

实验动物：选用清洁级健康新生24h内的SD大鼠，体重在5-8g，购自[动物供应商名称]，动物生产许可证号为[许可证编号]。大鼠饲养于温度（22±2）℃、相对湿度（50±10）%的环境中，12h光照/12h黑暗循环，自由摄食和饮水。

主要仪器设备：PCR仪（型号[具体型号]，[生产厂家]），用于基因扩增反应；实时荧光定量PCR仪（型号[具体型号]，[生产厂家]），可精确测定