抗体药物纯化柱再生调试技师（中级）考试试卷及答案.docVIP

抗体药物纯化柱再生调试技师（中级）考试试卷及答案

一、填空题（每题1分，共10分）

1.抗体纯化常用的亲和柱多为______柱。

2.柱再生前需先去除______。

3.高浓度NaOH常用于柱______。

4.再生后需用______平衡柱。

5.ProteinA柱再生常用的酸性洗脱液是______。

6.柱再生验证的关键指标包括______（答1个即可）。

7.再生过程中需控制______以避免柱床压缩。

8.含核酸杂质的柱可先用______处理。

9.再生后柱的______应符合使用要求。

10.柱再生记录需包含______（答1个即可）。

二、单项选择题（每题2分，共20分）

1.ProteinA柱再生时，NaOH的常用浓度是？

A.0.1MB.1MC.2MD.5M

2.柱再生后平衡的流速一般是？

A.0.5CV/minB.5CV/minC.10CV/minD.20CV/min

3.以下哪种试剂不用于ProteinA柱再生？

A.柠檬酸B.甘氨酸C.SDSD.NaOH

4.柱再生验证中，压力变化超过多少需重新再生？

A.5%B.10%C.15%D.20%

5.再生过程中，柱温一般控制在？

A.4℃B.25℃C.37℃D.50℃

6.柱床高度下降超过多少需补装？

A.5%B.10%C.15%D.20%

7.再生的正确步骤是？

A.平衡→再生→清洁→验证B.清洁→再生→平衡→验证

C.验证→再生→清洁→平衡D.再生→验证→平衡→清洁

8.去除残留抗体的酸性洗脱液pH一般是？

A.2.0-3.0B.4.0-5.0C.6.0-7.0D.8.0-9.0

9.再生后柱结合容量下降超过多少需更换？

A.10%B.20%C.30%D.40%

10.柱再生试剂需与柱的______兼容？

A.配基B.填料C.两者都是D.两者都不是

三、多项选择题（每题2分，共20分）

1.柱再生的目的包括？

A.去除残留抗体B.去除杂质C.恢复柱效D.延长柱寿命

2.ProteinA柱再生常用试剂有？

A.柠檬酸缓冲液B.甘氨酸-HClC.NaOHD.乙醇

3.柱再生验证的指标有？

A.压力B.结合容量C.柱效D.回收率

4.再生操作注意事项包括？

A.控制流速B.避免柱床压缩C.试剂新鲜D.记录完整

5.柱内常见杂质类型有？

A.蛋白残留B.核酸残留C.脂类残留D.多糖残留

6.需立即再生的情况是？

A.压力升高15%B.结合容量下降25%C.柱床下降5%D.回收率下降10%

7.平衡液选择需考虑？

A.配基稳定性B.目标抗体结合C.杂质洗脱D.成本

8.再生后柱的保存条件？

A.4℃B.含防腐剂C.无菌D.干燥

9.再生记录需包含的内容？

A.再生试剂B.流速C.温度D.验证结果

10.再生的关键步骤包括？

A.清洁残留B.酸性洗脱C.碱再生D.平衡验证

四、判断题（每题2分，共20分）

1.柱再生时流速越快越好。（）

2.ProteinA柱可用SDS再生。（）

3.再生后需验证柱效。（）

4.柱保存时需干燥。（）

5.高浓度NaOH可用于所有纯化柱再生。（）

6.再生记录只需记录日期。（）

7.柱床高度下降10%需补装。（）

8.酸性洗脱液pH越低越好。（）

9.再生后柱回收率应与新柱一致。（）

10.柱再生无需无菌操作。（）

五、简答题（每题5分，共20分）

1.简述ProteinA柱再生的基本步骤。

答案：ProteinA柱再生步骤：①清洁残留：用PBS冲洗（2-3CV，0.5CV/min），去除未结合杂质；②酸性洗脱：用pH2.0-3.0柠檬酸缓冲液洗脱残留抗体（2-3CV，0.5CV/min）；③碱再生：用0.1MNaOH冲洗（3-5CV，0.5CV/min），停留30min；④中和：用PBS冲洗至pH中性；⑤平衡：用目标缓冲液平衡（5-10CV）；⑥验证：检测压力、结合容量等指标，符合要求后记录。

2.柱再生验证的主要指标及意义？

答案：①压力：升高提示堵塞/压缩，需排查；②结合容量：反映抗体结合能力，下降≥20%需更换；③柱效：反映分离性能，下降提示填料老化；④回收率：目标抗体回收率下降提示再生不彻底；⑤pH稳定性：确保柱内pH符合后续结合要求。

3.柱再生操作的安全事项？

答案：①试剂防护：NaOH等强碱戴耐碱手套、护目镜；②生物防护：在生物安全柜操作，避免气溶胶；③设备防护：确认泵/阀门无泄漏；④废液处理：中和后按生物废液处置；⑤个人防护：穿实验服，操作后洗手。

4.柱床高度下降的原因及处理？

答案：原因：流速过快、压力波动大、填料磨损。处理：①停止再生，降流速至≤0.5CV/min；②下降≤10%：补装相同填料，搅拌沉降；③下降≥10%：更换填料；④后续控制流速，避免压力突变，定期检测柱床高度。

六、讨论题（每题5分，共10分）

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