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研究报告

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一例鸭圆环病毒与耐药性大肠杆菌混合感染的诊断与分析

一、病例概述

1.1.病例来源及背景

(1)该病例来源于我国某养殖场，养殖场内鸭群共计5000只，其中种鸭1000只，肉鸭4000只。病例发生前，养殖场曾进行过鸭圆环病毒疫苗的免疫接种，但接种率未达到100%。病例发生时间为2022年5月，持续时间为2个月。养殖场周边地区同期也发生了类似病例。

(2)病例发生初期，养殖场内部分鸭只出现精神沉郁、食欲减退、呼吸加快等症状。随着病情的发展，部分鸭只出现呼吸道症状，如咳嗽、气喘、流鼻涕等。部分鸭只还出现了腹泻、体重下降、关节肿胀等症状。根据初步观察，养殖场兽医怀疑为鸭圆环病毒感染。

(3)为了进一步确认病因，养殖场采集了部分疑似病例鸭只的血液、肝脏、肾脏等组织样本，并送往实验室进行检测。同时，养殖场也对饲养管理、环境卫生、饲料来源等方面进行了调查。初步调查显示，养殖场在饲养管理上存在一定的问题，如鸭舍通风不良、饲养密度过高、饲料营养不均衡等，这些因素可能加剧了鸭圆环病毒的传播和病情的严重程度。

2.2.临床症状

(1)病例鸭群中，有70%的鸭只表现出明显的临床症状。其中，30%的鸭只出现精神沉郁，表现为活动量减少，不愿飞翔，食欲下降。10%的鸭只出现呼吸道症状，如咳嗽、喘鸣、流鼻涕等，尤其在夜间和清晨尤为明显。据监测，这些症状的鸭只中，有5%伴有发热现象。

(2)在发病鸭群中，腹泻症状较为普遍，约占总数的80%。其中，50%的鸭只表现为轻度腹泻，粪便呈水样，含有少量黏液；另有30%的鸭只出现重度腹泻，粪便呈稀薄状，带有恶臭。根据体重下降情况，估计感染鸭只平均每天体重减轻约10克。

(3)此外，关节肿胀症状在病例中占20%。受影响的鸭只主要表现为跛行，行动困难。通过对关节液进行检测，发现关节液中存在大量白细胞，且关节液pH值降低。通过对病例鸭群进行统计分析，发现关节肿胀症状的发生与鸭圆环病毒感染呈显著正相关。在病例发生期间，养殖场共进行了200只鸭只的剖检，其中100只鸭只存在关节肿胀现象。

3.3.病理变化

(1)在病理变化方面，对病例鸭只进行剖检发现，80%的鸭只存在肝脏病变。肝脏表面呈现不同程度的淤血和肿胀，肝脏边缘有出血点。病理切片观察显示，肝脏细胞出现变性、坏死，肝小叶结构模糊。在100只剖检的鸭只中，有70只肝脏病变明显。

(2)肾脏病变在病例中占60%。肾脏体积增大，颜色变深，表面有出血点。肾脏切面可见肾小球肿胀，肾小管扩张，管腔内充满蛋白管型。病理切片显示，肾小球基底膜增厚，肾小球细胞增生。在200只剖检的鸭只中，有120只肾脏病变明显。

(3)肠道病变在病例中占50%。肠道黏膜脱落，表面有出血点，肠道内容物呈水样。病理切片观察发现，肠道上皮细胞变性、坏死，肠腺萎缩。在150只剖检的鸭只中，有75只肠道病变明显。此外，部分病例鸭只的脾脏、心脏和肺脏也出现不同程度的病变，如肿胀、出血和炎症等。

二、实验室检测方法

1.1.样本采集与处理

(1)样本采集工作在病例发生后的第3天开始进行，为确保样本的代表性，共采集了来自不同养殖区域、不同日龄的鸭只血液、肝脏、肾脏、肠道和呼吸道分泌物等组织样本。血液样本采用EDTA抗凝管采集，每个样本采集量为5毫升。对于组织样本，采用无菌操作技术，用生理盐水清洗后，分别剪取肝脏、肾脏、肠道和呼吸道组织，每个样本重量约5克。

(2)样本采集后，立即进行初步处理。血液样本在采集后2小时内，采用低温离心机进行离心，分离出血清，置于-20℃冰箱保存。组织样本在采集后，立即用无菌生理盐水冲洗，去除杂质，然后置于10%中性福尔马林溶液中固定，用于后续的病理学检查。对于呼吸道分泌物，使用无菌生理盐水进行稀释，并进行RNA提取。

(3)在样本处理过程中，严格遵循实验室生物安全规范，确保样本的无菌性和完整性。血液样本在处理前，使用无菌手套和口罩进行操作，防止污染。组织样本固定后，按照规定时间进行脱水、透明和浸蜡，制备成病理切片。呼吸道分泌物样本在提取RNA后，进行浓度测定和定量PCR检测，以检测鸭圆环病毒和耐药性大肠杆菌的存在。所有样本在处理和检测过程中，均记录详细操作步骤和时间。

2.2.鸭圆环病毒检测

(1)鸭圆环病毒检测采用实时荧光定量PCR方法。首先，提取病毒RNA，使用DNase处理去除可能的DNA污染。然后，通过逆转录反应将RNA转化为cDNA。PCR反应体系包括引物、探针、dNTPs、逆转录酶和DNA聚合酶等。PCR反应条件为94℃预变性，然后进行40个循环的变性、退火和延伸。

(2)引物和探针设计针对鸭圆环病毒的特定基因序列，以确保检测的特异性。阳性对照使用已知阳性的鸭圆环病毒标准株，阴性对照则使用未感染