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Rattin对Aβ31-35神经毒性的拮抗机制：行为、电生理与分子层面的探索

一、引言

1.1研究背景

阿尔茨海默病（Alzheimersdisease，AD），即老年性痴呆，是一种以认知和精神状况改变为主要表现的神经系统退行性疾病。其主要临床表现为智力下降、人格改变、进行性学习、记忆和注意力丧失等。AD的主要病理学特征包括脑内出现高密度的老年斑（senileplaque，SP）、神经原纤维缠结（neurofibrillarytangles，NFTs）和神经元丧失等。随着社会人口逐渐老龄化，AD的发病率也随之增加。据《世界阿尔茨海默病2018年报告》显示，每3秒钟，全球就会新增一位痴呆症患者，其中约60%-70%患有阿尔茨海默病，而我国目前约有1000万阿尔茨海默病患者。AD不仅严重威胁老年人的健康和生活质量，还给社会带来了巨大的人力及财力负担。

尽管AD的研究取得了一定进展，但其病因和发病机制目前尚无定论。普遍认为，老年斑中的主要成分β-淀粉样蛋白（β-amyloidprotein，Aβ）与AD的发病密切相关。Aβ是由淀粉样前体蛋白（APP）经β-分泌酶和γ-分泌酶裂解产生。一般认为，高浓度Aβ、Aβ的β折叠和纤维形成是具有神经毒性作用的基础。Aβ的神经毒性作用主要体现在诱导细胞凋亡，经研究发现神经细胞凋亡是AD神经元丢失的主要原因。在正常情况下，Bcl蛋白家族中的Bax/Bcl-2组成一个平衡体系，但Aβ可促进凋亡效应因子Bax的表达，下调抗凋亡因子Bcl-2的表达，改变Bax/Bcl-2之间的平衡而导致神经元凋亡。此外，沉积在神经元周围的Aβ作用于小胶质细胞膜上的Aβ受体，或通过与载脂蛋白E结合后作用于载脂蛋白E受体，使小胶质细胞活化、增殖，进一步加重神经损伤。

Aβ31-35是天然β淀粉样肽中具有神经毒性的最短序列，具有多种神经毒性相关的功能。体外研究表明，Aβ31-35是Aβ肽的功能性细胞毒性结构域，能够增加生物素化的Aβ(1-40)的磷酸化，增强CDK-1（细胞周期蛋白依赖性激酶-1）的活性，还能够抑制Aβ与细胞周期蛋白B1的结合。同时，Aβ31-35显示对小脑颗粒细胞（CGC）具有细胞毒性作用，并且这种作用可以被奥罗莫星在分化的人类畸胎癌细胞系Ntera2/cl-D1（NT-2）神经元中抑制。在AD的发病过程中，Aβ31-35可能通过这些神经毒性作用，在AD的发生和发展中发挥重要作用。

Humanin（HN）的发现为AD和其它记忆损伤疾病的治疗开辟了新的道路。2001年，日本东京KEIO大学医学院的Hashimoto教授及其同事根据AD患者的枕叶在发病过程中完好无损这一现象，推测在AD发病过程中，枕叶的神经元一定启动了某种基因的表达。通过对从AD患者脑的枕叶提取的cDNA文库的表达进行功能监测，发现了一个编码24肽的基因，并将其命名为Humanin（HN）。离体实验证明，这种多肽能有效、特异地抑制多种FAD基因和Aβ衍生物诱发的神经元的凋亡，因此被称为神经生存肽。目前，HN的作用机制仍不清楚，但这一发现至少为治疗AD带来了新的启示，人们期待通过对该多肽进行修饰，开发出一种具有美好前景的治疗AD的药物。令人欣喜的是，HN除存在于人染色体外，科学家们已在大鼠、小鼠、猴子、线虫等多种动物体内得到HN的对应物质。caricasole等从大鼠的cDNA文库中鉴别出HN的类似碱基片断，编码一条由38个氨基酸残基组成的多肽（C-末端比HN长14个氨基酸残基），并将其定名为Rattin（RN）。Rattin的发现为利用大鼠模型进行HN实验研究提供了极大便利。

本研究旨在探讨Rattin对Aβ31-35神经毒性的拮抗作用，通过行为学、电生理和分子机制等多方面的研究，深入了解Rattin的神经保护作用机制，为AD的预防和治疗提供新的策略和理论依据。

1.2研究目的和意义

本研究旨在全面深入地探究Rattin对Aβ31-35神经毒性的拮抗作用，从行为学、电生理和分子机制等多个层面，详细剖析Rattin发挥神经保护作用的具体过程和内在原理。具体而言，通过Morris水迷宫行为学试验，精准观察双侧大鼠海马内注射Rattin对Aβ31-35所致认知功能伤害的逆转效果，明确Rattin在改善动物空间学习和记忆能力方面的作用；运用在体海马CA1区场电位记录技术，在成功诱导兴奋性突触后电位的基础上，细致观察Rattin处理对Aβ31-35