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多重LAMP—熔解曲线法检测食品中两种食源性致病菌

一、1.研究背景与意义

1.食源性致病菌的危害

(1)食源性致病菌是指通过食物传播的细菌、病毒、寄生虫等微生物，它们可以引起各种食源性疾病。这些疾病不仅对人类健康构成严重威胁，还会对社会经济造成巨大损失。据统计，全球每年约有5亿至10亿人遭受食源性疾病的影响，其中约120万人因此死亡。其中，细菌性食源性疾病是最常见的类型，例如沙门氏菌、大肠杆菌、李斯特菌等，它们可以通过污染的食品进入人体，引起腹泻、发热、呕吐等症状。例如，2011年美国发生的一起沙门氏菌疫情，导致了1,200多人感染，数十人死亡。

(2)食源性致病菌的危害不仅体现在对人体健康的直接伤害上，还可能对患者的心理健康产生深远影响。长期的腹泻、呕吐等症状可能导致患者出现营养不良、脱水等问题，严重时甚至可能引发多器官功能障碍。此外，食源性疾病还可能导致孕妇、婴幼儿、老年人等特殊群体出现严重并发症，甚至死亡。据世界卫生组织报告，每年约有10万儿童因食源性疾病而死亡，其中大部分是5岁以下的婴幼儿。这些数据表明，食源性致病菌的危害不容忽视。

(3)食源性致病菌的传播途径广泛，包括食品生产、加工、储存、运输和销售等各个环节。一旦食品在某个环节受到污染，就可能引发大规模的食源性疾病暴发。例如，2013年欧洲爆发的马肉欺诈事件，涉及多个国家的数十万人，原因就是食品供应链中的各个环节存在食品安全隐患。此外，随着全球化的推进，食源性致病菌的传播范围也越来越广，跨区域、跨国界的食源性疾病暴发事件时有发生。这些事件不仅给患者带来痛苦，也对社会稳定和经济发展造成了严重影响。因此，加强食源性致病菌的防控工作，保障食品安全，刻不容缓。

2.食源性致病菌检测的现状

(1)食源性致病菌检测是保障食品安全的重要环节，近年来随着科技的发展和食品安全意识的提高，检测方法不断进步。目前，市场上应用的检测方法主要包括传统的微生物培养法和分子生物学检测技术。微生物培养法是传统检测方法中应用最广泛的一种，但其检测周期较长，通常需要2-7天，不适合快速检测。分子生物学检测技术如PCR、实时荧光定量PCR等，具有灵敏度高、特异性强、检测周期短等优点，但成本较高，且需要专业设备和技术支持。

(2)随着食品安全问题的频发，各国政府和相关机构对食源性致病菌检测的投入逐年增加。例如，美国食品药品监督管理局（FDA）每年投入约5亿美元用于食品安全监管，其中包括食源性致病菌检测。我国也加大了对食品安全检测的投入，据统计，2019年全国食品安全检测经费投入达到80亿元。这些资金主要用于实验室建设、检测设备购置、检测人员培训等方面。尽管投入不断加大，但与食品安全形势的需求相比，仍存在一定的差距。

(3)目前，食源性致病菌检测技术正朝着高通量、自动化、快速、低成本的方向发展。例如，高通量测序技术可以同时对多个样本进行检测，提高了检测效率；自动化检测设备可以实现样本处理、反应、结果分析等环节的自动化操作，降低了人工成本；快速检测技术如胶体金免疫层析法等，可以在短时间内检测出致病菌，为食品安全预警提供了有力支持。然而，这些技术的发展也面临一些挑战，如检测方法的标准统一、数据分析的准确性、实验室人员的技术水平等。因此，加强食源性致病菌检测技术的研发和应用，提高检测水平，是保障食品安全的关键。

3.多重LAMP-熔解曲线法的优势

(1)多重LAMP-熔解曲线法（Loop-mediatedisothermalamplificationcombinedwithmeltingcurveanalysis）是一种基于核酸扩增的分子生物学检测技术，它在食源性致病菌检测中展现出显著的优势。该方法的扩增过程在恒温条件下进行，无需昂贵的PCR仪器，大大降低了检测成本。据相关数据显示，多重LAMP-熔解曲线法的检测成本仅为传统PCR方法的1/10。例如，在2018年的一项研究中，研究人员使用多重LAMP-熔解曲线法对鸡肉样品中的沙门氏菌进行检测，结果显示该方法在检测成本上具有明显优势。

(2)多重LAMP-熔解曲线法具有极高的灵敏度和特异性。该技术能够检测到极低浓度的致病菌，灵敏度可达到10^-6个细胞/毫升。在食品安全检测中，这意味着即使样品中只有极少数的致病菌，也能被准确检测出来。例如，在2019年的一项研究中，研究人员使用多重LAMP-熔解曲线法对牛奶样品中的大肠杆菌进行检测，结果显示该方法能够准确检测到10^-6个细胞/毫升的大肠杆菌，远高于传统检测方法的灵敏度。

(3)多重LAMP-熔解曲线法的操作简便、快速，检测周期短。该方法的扩增过程在恒温条件下进行，通常只需30分钟至1小时即可完成。此外，多重LAMP-熔解曲线法采用熔解曲线