「翘客」技术手册：解锁血管危机预警信号：MMP-9的荧光现形记.pdfVIP

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「翘客」技术手册：解锁血管危机预警信

号：MMP-9的荧光现形记

研究背景

解码血管危机的生物标志物

血管系统是人体的生命枢纽，其健康状态取决于血管内皮细胞的功能

稳态。内皮细胞作为血管壁的“第一道防线”，在遭遇炎症、缺氧、

代谢异常等危机时，会释放特异性预警信号。其中，MMP-9（基质金

属蛋白酶，又称为明胶酶B）是反映血管损伤与重塑的核心分子标志

物，而CD31（即血小板内皮细胞黏附分子-1，PECAM-1）则是精准定

位内皮细胞的特异性生物标志物。二者的协同检测是评估血管病理状

态的关键技术路径。

MMP-9：动态时间表

MMP-9作为基质金属蛋白酶家族的核心成员，以无活性的92kDa酶

原形式（pro-MMP-9）储存于内皮细胞中，在血管面临危机时被快速

激活。炎症细胞因子（如TNF-α、IL-1β）、缺氧、高糖等因素，

会促使内皮细胞大量分泌MMP-9。激活后的MMP-9可精准降解血管基

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底膜的Ⅳ型胶原、明胶等核心成分，同时调控血管内皮生长因子（VEGF）

等信号分子的活性。

MMP-9的表达水平具有明确的病理指示意义。在动脉粥样硬化早期，

MMP-9的轻度升高提示内皮屏障受损。当斑块进入不稳定期，MMP-9

会呈爆发式表达，加速斑块破裂风险。在糖尿病微血管病变、高血压

肾损伤等疾病中，MMP-9的异常波动直接反映血管重塑的严重程度。

捕捉MMP-9的表达变化，相当于掌握了血管危机的“动态时间表”。

CD31：特异性身份标签

CD31是一种跨膜糖蛋白，分子量约130kDa，是内皮细胞的特异性生

物标志物。CD31仅高表达于血管内皮细胞连接处及少量血小板、白

细胞表面，在成熟内皮细胞中的表达具有高度稳定性。

CD31的核心作用是精准定位。在复杂的细胞群体或组织样本中，CD31

可像荧光标签一样标记出内皮细胞的轮廓，排除成纤维细胞、平滑肌

细胞等其他细胞的干扰，确保后续检测到的MMP-9信号均来自内皮细

胞，避免因信号混杂导致的误判。

简而言之，以CD31为“定位标”、荧光免疫技术为检测手段，靶向

捕捉内皮细胞MMP-9的“预警信号”，不仅是基础科研的重要手段，

更是连接血管分子机制与临床诊疗的关键桥梁。这也是本次实验的核

心意义所在。

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一、实验原理

本实验采用间接免疫荧光法，利用“CD31特异性标记内皮细胞联合

MMP-9特异性检测目标分子”的双重标记策略：

1.一抗孵育：将抗CD31一抗（标记内皮细胞）与抗MMP-9一抗（识

别目标分子）共同孵育样品，使一抗分别与细胞表面的CD31和细胞

内/外的MMP-9特异性结合；

2.荧光二抗孵育：加入两种不同荧光素标记的二抗（如抗CD31一

抗对应Cy3荧光二抗，抗MMP-9一抗对应FITC荧光二抗），二抗与

对应的一抗特异性结合，实现对CD31和MMP-9的荧光标记；

3.荧光检测：通过荧光显微镜观察，CD31阳性（红色荧光信号）的

细胞为内皮细胞，在该细胞群体中，MMP-9的绿色荧光强度反映其表

达水平。

二、实验材料与试剂

（一）样品准备

待检测样品：原代培养的血管内皮细胞

样品处理试剂：PBS缓冲液（pH7.4）、4%多聚甲醛固定液、0.1%Triton

X-100通透液（用于检测细胞内MMP-9）、5%BSA封闭液（含0.1%

Tween-20）

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（二）抗体试剂

一抗：

鼠抗人CD31单克隆抗体（购自义翘神州，Cat:10148-MM28）

兔抗人MMP-9多克隆抗体（购自义翘神州，Cat:80049-T24）