第二章细胞生物学研究方法：显微成像技术与细胞化学技术.pdfVIP

第二章细胞生物学研究方法

1.显微成像技术

显微技术是细胞生物学最基本的研究技术，有了光学显微镜的发明，人们才

有可能看细胞的镜像；后来电子显微镜的发展，导致细胞结构和功能的研究发生

了一次，使得生物学家可以在亚显微水平上重新认识细胞。

光学和电子显微镜镜像的形需要三个基本要素：①照明系统；②被观察

的样品；③聚焦和成像的透镜系统。只是，光学显微镜用玻璃透镜，电子显微镜

则用电磁透镜来观察。

常见的光学显微镜有：普通双筒显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、暗视野

显微镜和倒置显微镜。根据不同的样品，光学显微镜的样品主要有：样品的

固定、包埋和切片、染色以及自显影技术。

电子显微镜主要有：①透射电子显微镜，主要是让样片而成像；

②扫描电子显微镜，主要利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态、；③扫

描透射电镜与高压电镜，扫描透射电子显微镜既有透射电子显微镜的功能，又有

扫描电子显微镜的功能，高压电子显微镜则与透射电子显微镜基本相同，只是电

压特别高。电子显微镜的样片也需要固定、包埋、切片、染色等，但组织固定的

要求更高。此外，还有负染色、喷镀技术和冷冻断裂复型和冷冻蚀刻等样品

方法。

光学显微镜和电子显微镜是利用质子和电子使样品直接成像的技术，还有一

些显微方法是间接成像的。如扫描隧道显微镜、原子力显微镜还有X射线衍射。

2.细胞化学技术

主要有：⑴酶细胞化学技术，通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内

的定位；⑵免疫细胞化学技术，是利用免疫反应定位组织或细胞中抗原成分分布

的一类技术，主要分为免疫荧光技术和免疫电镜技术；⑶其他细胞化学技术，有

显微分光光度计、显微荧光光度计和核磁技术等。

3.细胞分选技术

细胞分选技术是细胞生物学研究中一个全新的技术领域，主要用流式细胞仪

（flowcytometer,FCM）对细胞或进行分选（两种分选的区别在于

分选的探针是寡居核苷酸），并对单个细胞或其他生物微粒进行定量分析。流式

细胞仪主要由激光光源、流室、讯号检测器和讯号分析部件等部分组成。

细胞分选过程：结合荧光抗体——细胞被荧光标记——稀释——超过声

波振动——液滴——两种情况：a.荧光标记细胞：荧光检测，检测（带负电）

b.无标记或无细胞：检测（带正电）

4.细胞工程技术

细胞工程技术是细胞生物学与遗传学的交叉领域，主要利用细胞生物学的原

理和方法，结合工程学的技术，按人们预先的设计，有计划地改变或创造细

胞遗传性的技术，内容包括：细胞融合、细胞生物反应器、转移、细胞器

移植和转移等。

本节介绍了（1）细胞培养：动物细胞培养包括贴壁培养和悬浮培养，植物

主要为组织培养；（2）细胞与单抗体克隆技术：B细胞与突变的骨髓细胞发

生细胞融合，产生既能产生单一抗体，又能不断增殖的细胞；（3）动物核移

植克隆技术。

5.分离技术

包括细胞组分的分离和生物大分子的分离，主要有离心分离技术和层析分离

技术，层析分离技术有可分为：凝胶过滤层析、亲和层析和离子交换层析。

6.分子生物学方法

分子生物学方法是分子水平上物大分子结构和功能的一系列方法，

包括重组、转移、分子杂交、PCR反应、序列分析等等。

工程：选择目的构建工程质粒，导入载体中表达，产生产品或进行

功能的分析。

PCR技术用以目的组片段，步骤为：步骤：引物设计和合成、

模版的、PCR反应、产物的分离和纯化。

选择性Knockout和鼠：目的正选择标记，末端插

入负选择标记，导入胚胎干细胞，进行重组，然后筛选出正确重组的细胞，

培养出小鼠，经过两次交配得到纯合的knockout鼠。

乳腺生物反应器技术：根据细胞生物学中蛋白质的合成与分选的机理，结合

工程技术、生物技术等，利用动物的乳腺分泌某种具有重要价值的基

因产物。