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pBR322质粒载体构建过程（经典方法+分子克隆实操）

pBR322是经典的人工构建质粒载体，也是分子克隆中最常用的大肠杆菌质粒之一，由Bolivar和Rodriguez于1977年构建，核心由pMB1复制子、氨苄青霉素（Amp?）和四环素（Tet?）抗性基因、多克隆位点（MCS）等元件拼接而成。其构建过程是体外DNA重组技术的典型应用，核心为元件扩增→酶切→连接→转化→筛选鉴定，以下是分步骤的详细实操流程，涵盖经典构建逻辑与实验室标准化操作。

一、pBR322质粒载体的核心元件组成

构建前需明确目标载体的核心功能元件，pBR322的全长为4361bp，各元