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培门冬酶与门冬酰胺酶对儿童急性淋巴细胞白血病诱导缓解治疗中凝血功能

一、培门冬酶与门冬酰胺酶概述

1.两种酶的基本结构及作用机制

培门冬酶，学名为门冬酰胺酶，是一种丝氨酸蛋白酶，主要由曲霉菌和某些细菌产生。其基本结构包括一个由四个亚基组成的复合体，每个亚基均包含一个催化中心和两个结合位点。催化中心负责识别并水解门冬酰胺，而结合位点则用于与门冬酰胺底物结合。在作用机制上，培门冬酶通过特异性地降解肿瘤细胞中的门冬酰胺，导致肿瘤细胞缺乏门冬酰胺而无法合成蛋白质，进而抑制其生长和增殖。这一过程对正常细胞的影响相对较小，因为正常细胞可以通过门冬酰胺的再循环来维持蛋白质合成。

门冬酰胺酶在体内的作用机制与培门冬酶相似，但它主要作用于门冬酰胺的合成途径中的关键酶——门冬酰胺合成酶。门冬酰胺酶通过抑制该酶的活性，阻止门冬酰胺的合成，从而抑制肿瘤细胞的生长。与培门冬酶不同的是，门冬酰胺酶对肿瘤细胞的抑制作用更为直接，因为它直接作用于合成门冬酰胺的酶，而非降解已存在的门冬酰胺。

两种酶在分子结构上的相似性使得它们在作用机制上也存在一些共同点。例如，它们都含有丝氨酸蛋白酶活性中心，这使其能够水解特定的肽键。此外，两种酶都需要辅因子来激活其活性，如金属离子。然而，它们在底物特异性、作用途径和细胞内的分布等方面也存在差异。这些差异决定了它们在治疗不同类型的肿瘤时可能产生不同的效果。深入了解这些差异有助于进一步优化治疗方案，提高治疗效果。

2.酶的来源及生产过程

(1)培门冬酶的主要来源是曲霉菌属，尤其是黑曲霉（Aspergillusniger）。在工业生产中，通常采用固体发酵技术，通过将黑曲霉接种到富含碳水化合物和氮源的培养基中，进行发酵培养。根据不同来源的文献，黑曲霉的发酵产量可达每升发酵液100-200单位。例如，某研究报道，在优化培养基和发酵条件后，黑曲霉发酵培养得到的培门冬酶产量可达每升发酵液200单位。

(2)门冬酰胺酶的生产过程主要分为菌种筛选、发酵、提取纯化和制剂制备四个阶段。首先，通过菌种筛选获得高产门冬酰胺酶的菌株。接着，在发酵罐中进行大规模发酵，控制发酵温度、pH值和溶解氧等参数，以确保酶的产量和质量。提取纯化过程中，采用多种分离技术，如离子交换、凝胶过滤和亲和层析等，以提高酶的纯度。最后，通过制剂制备，将纯化的酶与辅料混合，制成可供临床使用的药品。据统计，门冬酰胺酶的提取纯度可达90%以上。

(3)近年来，随着生物技术的发展，重组DNA技术被广泛应用于酶的生产。通过基因工程技术，将门冬酰胺酶的基因克隆到表达载体中，转化到宿主细胞中，实现酶的大规模生产。这种方法具有生产周期短、产量高、成本低等优点。例如，某生物制药公司利用重组DNA技术生产门冬酰胺酶，其产量可达每升发酵液300单位，远高于传统发酵方法。此外，重组DNA技术还可以通过基因修饰，提高酶的稳定性和活性，为临床治疗提供更多选择。

3.酶的稳定性及保存条件

(1)酶的稳定性是评估其生物活性持久性的重要指标。培门冬酶和门冬酰胺酶的稳定性受多种因素影响，包括温度、pH值、离子强度和溶剂类型等。在理想的条件下，这两种酶在室温下可以保持较长时间的活性。例如，在pH值4.5至8.5的范围内，培门冬酶的活性较为稳定，而门冬酰胺酶在pH值5.5至7.5时活性最佳。在低温条件下，如2-8°C，这两种酶的稳定性显著提高，可以长期保存而不失活。

(2)保存条件对酶的稳定性至关重要。培门冬酶和门冬酰胺酶通常需要避光保存，以防止光解作用导致酶活性下降。此外，应避免高温和极端pH值，因为这些条件可能导致酶的变性。在实际应用中，这两种酶常被冻干保存，以减少溶剂对酶活性的影响，并延长其保存期限。冻干后的酶在复水后，其活性可以迅速恢复至接近原始水平。

(3)在运输过程中，培门冬酶和门冬酰胺酶需要特别注意温度控制。通常，这些酶在运输时需保持在2-8°C的低温环境中，以防止酶活性因温度升高而降低。此外，为了减少震动对酶的损害，应采用防震包装。在实验室或临床使用前，应将冻干酶复水，并在规定的时间内使用完毕，以确保治疗效果。对于长期储存，建议将酶置于-20°C或更低温度的冰箱中，以保持其长期稳定性。

二、儿童急性淋巴细胞白血病凝血功能异常特点

1.白血病细胞对凝血功能的影响

(1)白血病细胞对凝血功能的影响主要体现在其对凝血因子合成、释放和活化的干扰上。白血病细胞在体内大量增殖时，会消耗大量的营养物质和能量，包括凝血因子前体。这种消耗导致血液中凝血因子的水平下降，从而影响正常的凝血过程。例如，白血病细胞对凝血因子V、VIII、IX和X的合成具有抑制作用，这些凝血因子在凝血过程中扮演着关键角色。此外，白血病细胞还会通过分泌某些细胞因子，如肿瘤坏死因子α（TNF