生物化学实验：血液中谷丙转氨酶活力测定.pdfVIP

实验五血液中谷丙转氨酶的测定

【目的和要求】

了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶

测定的原理和方法。

【原理】

生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与

α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代

谢过程中有重要作用。转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨

酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-酸转氨酶（简称谷丙转氨

酶）的最强。它们催化的反应如下。

正常人中只含有少量转氨酶。当发生肝炎，心肌梗死等病患时，中

转氨酶常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶的测定有重要意义。

测定转氨酶的方法很多，本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙

氨酸α-酮戊二酸后，生成的酸与2，4-二肼作用生成酸2，4-二

腙。

酸2，4-二腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。从

酸2，4-二腙的生成量，可计算酶的。

【操作方法】

1.曲线的给制：取6支试管，分别标上0，1，2，3，4，5六个号。按

下表所列的次序添加各试剂。

试管号

试剂(ml)

012345

酸钠液-0.050.100.150.200.25

谷丙转氨酶底物0.500.450.400.350.300.25

磷酸缓冲液

0.100.100.100.100.100.10

（0.1mol/L,pH7.4）

2,4-肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-酮戊二酸与

2，4-二肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。因此，在制作曲线时，须加

入一定量的底物，（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。

先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。向各管内加入

0.5ml2，4-二肼溶液后再保温20min，最后，分别向各管内加入0.4mol/L

氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min，以0号管作空白，测定520nm的光吸

收值。用酸的微摩尔数为横坐标，光吸收值为纵坐标，画出曲线。

2.酶的测定：取2支试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号

试管做为空白对照管。各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37℃水浴内10min，

使管内外温度平衡。取0.1ml加到第1号试管内，继续保温60min。到60min

时，向两支试管内各加入2，4-二肼试剂0.5ml，于37℃保温20min,然后

再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。在室温下静置30min后，测定

未知管的520nm波长光吸收值（显色后30min至2小时内其色度稳定）。在

曲线上查出酸的微摩尔数。（用1μmol酸代表1.0单位酶）。计算

每100ml中转氨酶的单位数。

【试剂和器材】

一`试剂

1.试管及试管架

2.吸管

3.恒温水浴

4.分光光度计

二`器材

1．0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）

2．2.0μmol/ml酸钠溶液。

取分析纯酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内[当日配制]。

3.谷丙转氨酶底物。

取分析纯α-酮戊二